白介素-10,白介素-17,白介素-22,白介素-23對人表皮黑素細(xì)胞生物活性的影響.pdf

1、目的：色素障礙性皮膚病主要病因為皮膚中黑素細(xì)胞(melanocyte,MC)異常,最終導(dǎo)致黑素生成異常所致,一般分為色素增加性疾病和色素減退性疾病兩大類,最常見的疾病分別為黃褐斑和白癜風(fēng),兩病發(fā)病率均較高,患者眾多,且此類疾病易診難治。本實驗主要目的為研究色素障礙性皮膚病的發(fā)病機(jī)制為色素性疾病的治療提供新的思路。方法:1、建立不添加霍亂毒素、十四烷酰法佛醋酸酯和3-異丁基-1-甲基黃嘌呤等細(xì)胞毒性物質(zhì)的正常人表皮黑素細(xì)胞培養(yǎng)體系;2、檢

2、測不同濃度IL-10, IL-17, IL-22, IL-23對黑素細(xì)胞增殖活性的影響(CCK-8法測定);3、檢測不同濃度IL-10, IL-17, IL-22, IL-23對黑素細(xì)胞酪氨酸酶活性的影響(L-DOPA法);4、流式細(xì)胞儀檢測:不同濃度IL-10, IL-17, IL-22, IL-23對黑素細(xì)胞凋亡的影響,全部數(shù)據(jù)采用SPSS統(tǒng)計軟件10.0版進(jìn)行分析。結(jié)果：1、添加HMGS-2的Medium254培養(yǎng)基可獲得大量純化

3、的黑素細(xì)胞。避免使用霍亂毒素、十四烷酰法佛醋酸酯、3-異丁基-1-甲基黃嘌呤等細(xì)胞毒性物質(zhì)。2、黑素細(xì)胞在 IL-10為50ng/ml濃度時增殖率隨著培養(yǎng)時間的延長而升高。當(dāng)培養(yǎng)24h、48h和72h后與對照組相比有極顯著的統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01)。但隨著IL-10濃度的升高其增殖率隨著培養(yǎng)時間的延長反而有下降趨勢。濃度為200ng/ml培養(yǎng)48h和72h后與對照組相比有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。3、IL-17隨著培養(yǎng)時間的延長呈劑

4、量依賴性抑制黑素細(xì)胞的增殖。當(dāng)IL-17濃度為50ng/ml培養(yǎng)48h和72h后與對照組相比有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05);IL-17濃度為100ng/ml和200ng/ml培養(yǎng)48h和72h后與對照組相比有極顯著的統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01)。4、IL-22隨著濃度的增加呈明顯的時間依賴性抑制黑素細(xì)胞的增殖。當(dāng)培養(yǎng)時間24h時只有濃度為200ng/ml與對照組相比有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05);當(dāng)培養(yǎng)時間為48h時IL-22濃度從50ng/

5、ml、100ng/ml、200ng/ml與對照組相比均有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05);當(dāng)培養(yǎng)時間為72h時所有濃度均抑制黑素細(xì)胞的增殖,與對照組相比有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)濃度為100ng/ml和200ng/ml時與對照組相比有極顯著的統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01)。5、IL-23隨著濃度的增加呈時間依賴性抑制黑素細(xì)胞的增殖。當(dāng)培養(yǎng)時間為24h時濃度為200ng/ml時與對照組相比有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05);當(dāng)培養(yǎng)時間為48h時濃度為1

6、00ng/ml和200ng/ml與對照組相比均有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05);當(dāng)培養(yǎng)時間為72h時濃度從50ng/ml、100ng/ml、200ng/ml與對照組相比均有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05);且濃度為200ng/ml時在培養(yǎng)48h和72h時與對照組相比均有極顯著的統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01)。6、酪氨酸酶的活性檢測在培養(yǎng)48h后黑素細(xì)胞在 IL-10為50ng/ml濃度時酪氨酸酶活性升高,較對照組有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。IL-1

7、7和IL-22在濃度為50ng、100ng/ml、200ng/ml時抑制酪氨酸酶的活性,與對照組相比有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。IL-23在濃度為100ng/ml和200ng/ml時抑制酪氨酸酶的活性,與對照組相比有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)7、用含100ng/ml的IL-10, IL-17, IL-22, IL-23培養(yǎng)黑素細(xì)胞48小時后凋亡率分別為5.2％、32.1％、23.0％、23.0％,對照組為5.1％, IL-10與對照組

8、相比無明顯差異,IL-17, IL-22, IL-23培養(yǎng)黑素細(xì)胞的凋亡率與對照組相比有明顯差異。結(jié)論：1、使用添加HMGS-2的Medium254培養(yǎng)基,同時采用分離酶Ⅱ消化法、兩段法、胰蛋白酶差速消化法可去除角質(zhì)形成細(xì)胞、成纖維細(xì)胞,并獲得大量純化的黑素細(xì)胞。2、IL-10的降低可能參與白癜風(fēng)的發(fā)病,且IL-10的濃度影響黑素細(xì)胞的生長和酪氨酸酶的活性,糾正細(xì)胞因子的表達(dá)可能有利于白癜風(fēng)的復(fù)色。3、高表達(dá)的IL-22可能導(dǎo)致黑素細(xì)胞