白細胞介素-1、10及腫瘤壞死因子基因多態(tài)性與腦梗塞相關(guān)性研究.pdf

1、腦梗塞(CerebralInfarction，CI)是中老年人的一種常見病、多發(fā)病，病死率與致殘率都比較高。CI由多種危險因素引起，目前己認識到的危險因素約有100多種，包括高齡、高血壓、心臟病、糖尿病、高脂血癥、高粘血癥、纖維蛋白原水平異常、吸煙及酗酒等。通過對這些危險因素的控制，可以明顯延緩和逆轉(zhuǎn)動脈粥樣硬化的病理過程，降低腦梗塞的發(fā)病率。但在臨床中卻發(fā)現(xiàn)，許多人即使具備上述危險因素卻未發(fā)生腦梗塞，而一些不具備上述危險因素的人卻發(fā)生

2、了腦梗塞，說明腦梗塞的發(fā)生除與環(huán)境因素有關(guān)外，可能還與遺傳等其他因素有關(guān)。芬蘭的一項前瞻性研究顯示，腦卒中患者子女該病的發(fā)病率較陰性家族史者增加2倍，在同齡、同性別的人員中，有腦卒中家族史者更易患該病。提示腦梗塞的發(fā)生還與遺傳因素有關(guān)。近年來眾多國內(nèi)外學(xué)者認為腦梗塞是多基因遺傳性疾病，而環(huán)境因素對遺傳度影響很大，遺傳因素的作用可通過環(huán)境因素而改變。目前的研究表明，腦梗塞的發(fā)生與一些特異性單基因的突變有關(guān)，這些基因包括：血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(

3、ACE)基因、血管緊張素原(AGT)基因、基質(zhì)金屬蛋白酶3(MMP3)基因、白細胞介素-1(IL-1)基因、白細胞介素-6(IL-6)基因、腫瘤壞死因子(TNF)基因等，其中IL-1、IL-6、TNF等均屬于炎癥細胞因子。 國內(nèi)外大量研究顯示，炎性反應(yīng)在動脈粥樣硬化及腦血管病的發(fā)病過程中起著重要作用。甚至有學(xué)者認為動脈粥樣硬化就是一種炎癥性疾病，硬化斑塊的炎癥反應(yīng)是動脈內(nèi)膜侵蝕及斷裂的重要原因。而且動脈粥樣硬化與腦梗塞有關(guān)，也是

4、腦梗塞及冠心病的常見和主要的病理改變之一。體外及動 物實驗發(fā)現(xiàn)炎癥反應(yīng)與腦梗塞、慢性穩(wěn)定性心絞痛、急性不穩(wěn)定性心絞痛、急性心肌梗死、冠心病的發(fā)病有一定的相關(guān)性，參與這些炎癥反應(yīng)的細胞因子有TNF-a、TNF-β、IL-1、IL-6、IL-10、γ-干擾素和轉(zhuǎn)化生長因子-β等，其中TNF-a、TNF-β、IL-1、IL-6屬于促炎癥細胞因子，而IL-10屬于抗炎癥細胞因子。TNF-a、TNF-β、IL-1、IL-6、IL-10均有

5、一定的基因多態(tài)性，且現(xiàn)已證實TNF-a、TNF-β、IL-1α及β的基因多態(tài)性與腦梗塞及冠心病的發(fā)病有一定的相關(guān)性，但國內(nèi)外的研究結(jié)果不一致。IL-10的基因多態(tài)性與冠心病的發(fā)病也有一定的相關(guān)性，但其與腦梗塞的發(fā)病是否相關(guān)國內(nèi)外均未見報道。故本實驗選取一定數(shù)量的腦梗塞患者及正常人，對其TNF-a、TNF-β、IL-1α及β、IL-10的基因多態(tài)性進行分析，以進一步了解這些炎癥細胞因子的基因多態(tài)性與腦梗塞的相關(guān)性。 材料和方法

6、 1.IL-10基因多態(tài)性與腦梗塞的關(guān)系 選取我院2005年6月至2006年4月就診的腦梗塞患者204例作為腦梗塞組(CI組)，其中男121例，女83例，年齡43～80(平均55±8.6)歲，符合全國第四屆腦血管病會議修訂的診斷標準，全部病例均經(jīng)臨床及頭顱CT或MRI掃描證實，排除腦出血、腦栓塞及影響血脂代謝的肝、腎、內(nèi)分泌疾病。并選取同期來我院體檢的131名健康人作為對照組，其中男90例，女41例，年齡31～53(平均35

7、±4.6)歲。取外周靜脈血(EDTA抗凝)2mL作為標本，提取基因組DNA，用序列特異性引物和聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)、限制性內(nèi)切酶酶切技術(shù)，分析IL-10-592C/A，-819C/T，-1082G/A三個位點的基因多態(tài)性。 2.IL-1基因多態(tài)性與腦梗塞的關(guān)系 選取我院2005年6月至10月就診的腦梗塞患者110例作為腦梗塞組(CI組)，其中男60例，女50例，年齡42～77(平均56±8.2)歲，符合全國第四屆腦血

8、管病會議修訂的診斷標準，全部病例均經(jīng)臨床及頭顱CT或MRI掃描證實，排除腦出血、腦栓塞及影響血脂代謝的肝、腎、內(nèi)分泌疾病。并選同期來我院體檢的110名健康人作為對照組，其中男58例，女52例，年齡36～74(平均55±6.7)歲，均無心、腦、肝、腎疾病及糖尿病、甲狀腺疾病史，近期無感染及炎癥。取外周靜脈血(EDTA抗凝)2mL作為標本，提取基因組DNA，采用序列特異性引物和聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)、限制性內(nèi)切酶酶切技術(shù)，分析IL-1α-

9、889C/T，IL-1β+3953C/T，IL-1β-511C/T的基因多態(tài)性。 3.TNF-α及-β基因多態(tài)性與腦梗塞的關(guān)系 腦梗塞(CI)組110例，其中男60例，女50例，年齡42～77(平均56±8.2)歲，為我院2005年6月至10月就診的患者，符合全國第四屆腦血管病會議修訂的診斷標準，全部病例均經(jīng)臨床及頭顱CT或MRI掃描證實，排除腦出血、腦栓塞及影響血脂代謝的肝、腎、內(nèi)分泌疾病。對照組110例，其中男58例

10、，女52例，年齡36～74(平均55±6.7)歲，為來我院體檢的健康人。取外周靜脈血(EDTA抗凝)2mL作為標本，提取基因組DNA，用序列特異性引物和聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)、限制性內(nèi)切酶酶切技術(shù)，分析TNF-α及-β的基因多態(tài)性。 4.IL-10對腦缺血大鼠的神經(jīng)保護作用 將80只清潔級SD大鼠隨機分為4組，分別為側(cè)腦室注射組、側(cè)腦室注射對照組、尾靜脈注射組、尾靜脈注射對照組，每組20只。所有大鼠均采用三氯化鐵化學(xué)誘

11、導(dǎo)法制作大腦中動脈血栓閉塞模型，造模4h后進行神經(jīng)癥狀評分(評分越低提示腦損害越輕，越高提示腦損害越嚴重)。評分后側(cè)腦室注射組由大鼠右側(cè)側(cè)腦室注射IL-101μg/kg，注射速度15μg/h；尾靜脈注射組由大鼠尾靜脈注射IL-101μg/kg，注射速度15μg/h；側(cè)腦室注射對照組及尾靜脈注射對照組則分別從右側(cè)側(cè)腦室及尾靜脈注射等體積生理鹽水。給藥24h后再次進行神經(jīng)癥狀評分，然后斷頭處死大鼠，取腦，測量各組大鼠腦梗死范圍。 研

12、究結(jié)果 1.IL-10基因多態(tài)性與腦梗塞的關(guān)系CI組IL-10-1082G/A基因型的分布頻率與對照組比較有顯著性差異(P＜0.01)，IL-10-1082A等位基因頻率為99.51％，對照組為95.80％，兩組比較有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.01)；IL-10-592C/A和IL-10-819C/T的基因型分布頻率及等位基因頻率與對照組無差異(P＞0.05)。 2.IL-1基因多態(tài)性與腦梗塞的關(guān)系 CI組IL-1α-

13、889C/T及IL-1β+3953C/T基因型分布及等位基因頻率與對照組比較均有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)，其中CI組IL-1α-889T等位基因頻率及IL-1β+3953T等位基因頻率均較對照組增高(P＜0.05)；而IL-1β-511C/T基因型分布及等位基因頻率與對照組比較均無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。 3.TNF-α及-β基因多態(tài)性與腦梗塞的關(guān)系 CI組TNF-α等位基因分布頻率與對照組比較有顯著性差異(P＜0

14、.05)，CI組TNFαA等位基因頻率為0.0364，對照組為0.1091，兩組比較有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)；CI組TNFβ等位基因分布頻率與對照組有顯著性差異(P＜0.05)，其中TNFβA/A基因型頻率(41.82％)明顯高于正常人(26.36％)，但G與A的含量無顯著性差異(P＞0.05)。 4.IL-10對腦缺血大鼠的神經(jīng)保護作用 ①腦梗死范圍：側(cè)腦室注射組和尾靜脈注射組均顯著小于相應(yīng)對照組(P＜0.01)，

15、但側(cè)腦室注射組和尾靜脈注射組兩組間無差異。②神經(jīng)癥狀評分：給藥前4組無差異(P＞0.05)，給藥后側(cè)腦室注射組和尾靜脈注射組均顯著低于相應(yīng)的對照組(P＜0.01)，但兩組間無差異(P＞0.05)。 結(jié)論 1.IL-10(-1082G/A)基因多態(tài)性與CI的發(fā)病有一定相關(guān)性，IL-10(-1082)A等位基因頻率增高可能明顯引起腦梗塞發(fā)病率增高。 2.遺傳因素在腦梗塞的發(fā)病中起著一定的作用。IL-1α-889及IL