Cajal間質(zhì)細胞與血紅素氧合酶-2在糖尿病大鼠結(jié)腸組織中的改變.pdf

1、糖尿病胃腸功能紊亂是糖尿病(diabetesmellitus，DM)極為常見并發(fā)癥之一，近年來糖尿病胃腸功能紊亂的研究熱點主要集中于神經(jīng)、胃腸激素以及血管病變上，但是糖尿病胃腸功能紊亂的發(fā)病機制目前仍未明確。 [目的]1.建立糖尿病大鼠模型，為探討糖尿病性胃腸功能紊亂的發(fā)病機制提供載體。 2.探討糖尿病大鼠結(jié)腸組織中Cajal間質(zhì)細胞的分布及其超微結(jié)構(gòu)的改變、Cajal間質(zhì)細胞與c-kitmRNA表達的關(guān)系。 3

2、.探討糖尿病大鼠結(jié)腸組織中血紅素氧合酶-2的改變。 4.探討糖尿病大鼠結(jié)腸組織中Cajal間質(zhì)細胞與血紅素氧合酶-2的共表達情況。 [方法]1.采用一次性腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)法，按80mg/kg的劑量建立糖尿病大鼠模型；對照組注射等量的枸櫞酸緩沖液，飼養(yǎng)6周后用炭墨推進試驗測定大鼠胃腸推進率。 2.分別取兩組大鼠近端和遠端結(jié)腸組織，用透射電鏡觀察糖尿病組和對照組大鼠離體結(jié)腸組織中Cajal間質(zhì)細胞的超微結(jié)

3、構(gòu)；免疫組化標記結(jié)腸組織Cajal間質(zhì)細胞，計算機圖像分析系統(tǒng)分析兩組大鼠結(jié)腸組織中c-kit陽性細胞面積的變化；用RealTimePCR方法檢測大鼠結(jié)腸組織中c-kitmRNA的表達情況。 3.分別取兩組大鼠近端和遠端結(jié)腸組織，免疫組化標記結(jié)腸組織血紅氧合酶-2，計算機圖像分析系統(tǒng)分析兩組大鼠結(jié)腸組織中血紅素氧合酶-2陽性細胞面積的變化；用RT-PCR和RealTimePCR方法檢測大鼠結(jié)腸組織中血紅素氧合酶-2mRNA的表達

4、情況；用Westen-blot方法檢測結(jié)腸組織中血紅素氧合酶-2蛋白的表達情況。 4.雙重免疫熒光同時標記Cajal間質(zhì)細胞與血紅素氧合酶-2，觀察Cajal間質(zhì)細胞與血紅素氧合酶-2的共表達情況。 [結(jié)果]1.糖尿病大鼠血糖值比對照組顯著升高(p＜0.05)；體重較對照組顯著降低(p＜0.05)；胃腸推進率與對照組相比顯著降低(p＜0.05)。2.正常大鼠結(jié)腸組織Cajal間質(zhì)細胞有完整的基膜，豐富的沿細胞膜分布的小空

5、泡，胞質(zhì)內(nèi)細胞器豐富，以線粒體最顯著，異染色質(zhì)較多，沿核膜分布；Cajal間質(zhì)細胞之間、與神經(jīng)元細胞、肌細胞之間形成很多的縫隙連接。糖尿病大鼠結(jié)腸組織中Cajal間質(zhì)細胞與其他細胞間的縫隙連接顯著減少、結(jié)構(gòu)破壞、連接松散；細胞器變性、減少；胞質(zhì)廣泛溶解；核周間隙增寬。 3.糖尿病組大鼠近端、遠端結(jié)腸肌間神經(jīng)叢c-kit陽性細胞面積較對照組顯著減少(P＜0.05)；近端、遠端結(jié)腸組織中c-kitmRNA的表達量較對照組顯著減少(P

6、＜0.05)。 4.糖尿病組大鼠近端、遠端結(jié)腸肌間神經(jīng)叢血紅素氧合酶-2陽性細胞面積較對照組顯著減少(P＜0.05)；近端、遠端結(jié)腸組織中血紅素氧合酶-2mRNA及其蛋白的表達量均較對照組顯著減少(P＜0.05;P＜0.05)。 5.雙重免疫熒光顯示，對照組與糖尿病組大鼠結(jié)腸組織c-kit陽性細胞與血紅素氧合酶-2陽性細胞在同一部位表達。 [結(jié)論]1.糖尿病大鼠較對照組大鼠體重減輕、胃腸推進率顯著降低，說明6周糖

7、尿病大鼠已經(jīng)存在胃腸功能紊亂，以胃腸運動減慢為主。 2.正常大鼠結(jié)腸組織中Cajal間質(zhì)細胞具有獨特的超微結(jié)構(gòu)，糖尿病大鼠結(jié)腸組織中Cajal間質(zhì)細胞超微結(jié)構(gòu)發(fā)生明顯改變。 3.糖尿病大鼠近端、遠端結(jié)腸組織肌間神經(jīng)叢Cajal間質(zhì)細胞數(shù)量較對照組明顯減少，Cajal間質(zhì)細胞數(shù)量減少可能與c-kit基因表達下調(diào)有關(guān)。 4.糖尿病大鼠近端、遠端結(jié)腸組織中血紅素氧合酶-2的分布、基因及其蛋白的表達均較對照組明顯減少。