穿刺法誘導(dǎo)大鼠椎間盤退行性變的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究背景： 動物模型是研究椎間盤退變發(fā)生機(jī)制，并驗(yàn)證各種治療手段安全性和有效性的一種可靠手段，建立一種穩(wěn)定可靠的腰椎間盤退變動物模型將為研究椎間盤退行性變的發(fā)病機(jī)制提供有利條件，也為研究各種阻斷甚至逆轉(zhuǎn)椎問盤退變的治療方法或藥物提供了一個(gè)實(shí)驗(yàn)載體。椎間盤退行性變動物模型可以劃分為體內(nèi)、體外模型和計(jì)算機(jī)模擬模型三大類。但是到目前為止，仍沒有一種得到公認(rèn)的比較理想的動物模型以供研究之用。本研究創(chuàng)新性地采用穿刺法誘導(dǎo)了大鼠尾椎間盤退變

2、，建立了一種簡便、可靠、適合于大規(guī)模實(shí)驗(yàn)研究的椎間盤退變動物模型。 目的： 創(chuàng)建一種操作簡單、可重復(fù)性好、適合于大樣本研究的大鼠椎間盤退變模型。 方法健康雄性SD大鼠180只，取大鼠尾Co7/8、Co8/9椎間盤作為實(shí)驗(yàn)對象，隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對照組，用9號注射器針頭經(jīng)皮穿刺大鼠尾C07/8、C08/9椎間盤，根據(jù)穿刺深度不同可分為貫穿穿刺法和中心穿刺法。貫穿穿刺法：針頭從鼠尾側(cè)方中線垂直進(jìn)針，刺入鼠尾椎間盤時(shí)，有

3、明顯落空感，繼續(xù)進(jìn)針，直至穿透對側(cè)皮膚為止。停留針頭于椎間盤內(nèi)約5秒鐘后拔出。中心穿刺法：在9號無菌注射器針頭外套上自制的限制器，針頭從鼠尾椎間盤側(cè)方垂直刺入有落空感后，即停止進(jìn)針，針頭停留約5秒后拔出。分別于術(shù)后7、14、28天測量拍攝鉬靶X線片，測量椎問隙高度變化(DHI％)，取材做病理切片行番紅-固綠-蘇木素染色，測定并分析椎間盤內(nèi)葡萄糖胺聚糖(glycosaminoglycan，GAG)含量、羥脯氨酸含量和水分含量的變化。

4、 結(jié)果： 1.鉬靶X線檢查：兩種穿刺方法在穿刺后7天，沒有發(fā)現(xiàn)椎間盤的高度發(fā)生明顯變化(貫穿穿刺組p=0.565；中心穿刺組p=0.265)；術(shù)后14天開始出現(xiàn)椎間隙下降(貫穿穿刺組DHI％85.16±4.68％，p<0.001；中心穿刺組DHI％92.35±3.26％，p=0.004)，術(shù)后28天椎間盤DHI％下降持續(xù)存在(貫穿穿刺組DHI％81.25±6.55％，p<0.001；中心穿刺組DHI％89.27±3.73％，p

5、=0.018)。 2.組織學(xué)變化：椎間盤組織學(xué)的變化包括：髓核體積減小和細(xì)胞減少，纖維環(huán)排列紊亂，細(xì)胞外基質(zhì)著色改變，細(xì)胞化生。對椎間盤病理切片的組織學(xué)評分結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，發(fā)現(xiàn)兩種穿刺方法處理的椎間盤在術(shù)后7、14、28天與對照組相比，差異均有顯著性意義(均為p<0.01)，說明穿刺成功地誘導(dǎo)椎間盤出現(xiàn)組織學(xué)退變特征。 3.蛋白聚糖含量的變化：兩種穿刺模型椎間盤GAG含量在術(shù)后均出現(xiàn)了下降，并且二者的變化趨勢相似。穿刺

6、后7天，處理組椎間盤GAG含量和對照組相比沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。至術(shù)后14天，處理組椎間盤GAG含量下降出現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(貫穿穿刺法：p=0.003；中心穿刺法：p=0.003)。術(shù)后28天，這種差異仍然存在(貫穿穿刺法：p=0.006；中心穿刺法：p<0.001)。其中，貫穿穿刺法造成GAG含量下降的程度要比中心穿刺法嚴(yán)重。 4.羥脯氨酸含量和水分含量的變化：兩種方法造成的椎間盤退變模型，在術(shù)后一個(gè)月內(nèi)，處理組和對照組相比均沒有發(fā)現(xiàn)椎