內生真菌產鬼臼毒素類物質發(fā)酵條件的研究.pdf

1、鬼臼毒素類物質因具有顯著的抗病毒、抗腫瘤活性，在醫(yī)藥領域具有重要的應用價值。目前該類物質的獲得主要是從植物中提取，但天然植物資源有限，無法滿足市場需求，利用植物內生真菌可產生與宿主相同代謝物的特性，通過微生物發(fā)酵獲得該類物質，為獲得鬼臼毒素類原料藥物質資源提供了新途徑。目前這方面的研究多集中于對有價值菌株的篩選。本研究對已獲得的可產生鬼臼類物質菌株Md的發(fā)酵條件進行研究，以期為用微生物發(fā)酵法生產藥用植物活性成分提供參考。 目的：

2、對可產生鬼臼毒素類物質內生真菌進行發(fā)酵研究，為解決鬼臼類抗癌藥物短缺提供新的途徑；并通過研究獲得用微生物發(fā)酵生產藥用植物活性成分的工藝數(shù)據(jù)，為實現(xiàn)工業(yè)化生產奠定基礎。 方法：利用薄層層析、薄層色譜掃描、高效液相色譜、氫核磁共振確定菌株Md、Iy發(fā)酵培養(yǎng)物中的目的成分；設計了適于菌株Md、Iy生長的半合成發(fā)酵培養(yǎng)基并分別優(yōu)化了其搖瓶發(fā)酵條件。L9(3<'4>)正交試驗優(yōu)化了從菌株Md發(fā)酵培養(yǎng)物中提取鬼臼類物質的提取條件。

3、結果：確定菌株Md可產生鬼臼毒素，菌株Iy可產生鬼臼毒素葡萄糖甙；經(jīng)優(yōu)化后的半合成發(fā)酵培養(yǎng)基配方為：2％淀粉、2％蔗糖、0.2％蛋白胨、0.2％硫酸銨，0.1％酵母膏、0.02％K<,2>HPO<,4>、0.02％CaCO<,3>、0.02％NaCl，水100ml，pH 6.8。采用該發(fā)酵培養(yǎng)基，Md菌株生物量提高約34.7％，鬼臼毒素產量提高約13.9％。Md菌株優(yōu)化后的搖瓶發(fā)酵條件是：初始pH6.0，裝液量100mL/250mL三角

4、瓶，接種量15％，28℃培養(yǎng)7天；菌株Iy優(yōu)化后的搖瓶發(fā)酵條件是：初始pH6.5，裝液量80mL/250mL三角瓶，接種量10％，28℃培養(yǎng)6天。菌株Md 50L發(fā)酵罐放大試驗表明菌體生長較好，產物合成穩(wěn)定。確定的下游產物提取、分離方法為：菌絲體冷凍4h，組織搗碎機破碎20s，用3倍量的氯仿提取破碎的細胞液3次，每次10h；提取率明顯提高。 結論：得到用發(fā)酵法獲得鬼臼毒素類物質和從發(fā)酵產物中提取鬼臼類物質的技術路線，該研究具有實