LGR4基因敲除成年鼠眼表型研究.pdf

1、目的： 明確LGR4基因敲除的成年小鼠眼部存在的特異性畸變及眼功能異常，為明確LGR4基因在小鼠視覺系統(tǒng)疾病中的作用及其與視覺系統(tǒng)發(fā)育缺陷的聯(lián)系提供一定的實驗基礎(chǔ)。 方法： 由LGR4雜合子小鼠(LGR4+/-)繁殖得到野生型小鼠(LGR4+/+)及LGR4基因敲除小鼠(LGR4-/-)，PCR.確定基因型，飼養(yǎng)至8周齡時作為實驗對象，以同窩LGR4+/+小鼠為LGR4-/-小鼠的對照組。通過LaeZ染色法確定L

2、GR4受體在小鼠眼部的表達(dá)部位：使用酚紅棉線測量小鼠眼表淚液量、紅外偏心攝影驗光儀測量小鼠的眼屈光狀態(tài)、角膜曲率計(附加+20D)測量小鼠相對角膜曲率半徑、裂隙燈顯微鏡觀察小鼠眼前節(jié)，比較LGR4+/+小鼠與LGR4-/-小鼠的眼睛是否存在功能上的不同；通過石蠟切片HE染色觀察并測量LGR4+/+小鼠與LGR4-/-小鼠眼球前房角大小、視網(wǎng)膜神經(jīng)纖維層厚度及計數(shù)單位長度神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)量，確定LGR4-/-小鼠眼部是否存在解剖上的畸變。

3、 結(jié)果： 1.LacZ染色法確定LGR4受體在小鼠眼部的表達(dá)部位 LGR4受體在小鼠眼部多個組織包括睫狀上皮、晶體皮質(zhì)、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層、內(nèi)核層、外叢狀層、外界膜等均有明顯表達(dá)。 2.酚紅棉線測量小鼠眼表淚液量 B6背景LGR4-/-與LGR4+/+小鼠的眼表淚液量，右眼分別為(5.85±1.29)mm/30s和(6.00±2.84)mm/30s，左眼分別為(6.10±0.84)mm/30s和(5.82±

4、2.24)mm/30s，均無顯著性差異；CD1背景LGR4-/-與LGR4+/+小鼠的眼表淚液量，右眼分別為(7.18±2.72)mm/30s和(6.522.06)mm/30s，左眼分別為(6.952.15)mm/30s和(5.62±1.93)mm/30s，右眼和左眼統(tǒng)計學(xué)分析顯示分別為P＞0.05和P＜0.05。 3.紅外偏心攝影驗光儀測量小鼠的眼屈光狀態(tài) B6背景LGR4-/-與LGR4+/+小鼠的屈光狀態(tài)，右眼分別

5、為(6.20±8.65)D和(9.43±8.08)D，左眼分別為(7.56±9.23)D和(9.69±6.55)D，均無顯著性差異；CD1背景LGR4-/-與LGR4+/+小鼠的屈光狀態(tài)，右眼分別為(6.27±9.80)D和(0.87±9.09)D，左眼分別為(10.62±6.11)D和(1.16±10.66)D，統(tǒng)計學(xué)分析顯示分別為P＜0.05和P＞0.05。 4.角膜曲率計(附加+20D)測量小鼠相對角膜曲率半徑 B

6、6背景LGR4-/-與LGR4+/+小鼠的相對角膜曲率半徑及CD1背景LGR4-/-與LGR4+/+小鼠的相對角膜曲率半徑，均顯示LGR4-/-小鼠相對角膜曲率半徑小于同窩LGR4+/+小鼠，P＜0.05，差異有顯著性。 5.裂隙燈顯微鏡觀察LGR4-/-小鼠眼前節(jié) 裂隙燈顯微鏡下看到LGR4-/-小鼠眼部出現(xiàn)小眼畸形、角膜潰瘍、角膜大皰、虹膜粘連、瞳孔移位、房角變窄、白內(nèi)障等眼前節(jié)發(fā)育不良(Anteriorsegmen

7、tdysgenesis，ASD)的改變。 6.石蠟切片HE染色觀察LGR4-/-小鼠眼部是否存在解剖學(xué)畸變： 石蠟切片顯示LGR4-/-小鼠的角膜、房角結(jié)構(gòu)和視網(wǎng)膜均有明顯改變，眼前節(jié)變化類似ASD。觀察到的LGR4-/-小鼠角膜病變包括基質(zhì)紊亂、新生血管、中性粒細(xì)胞浸潤、角膜大皰等，發(fā)生機(jī)率為65.38％(17/26)；虹膜及房角結(jié)構(gòu)改變包括虹膜前粘、房角關(guān)閉、瞳孔移位等，發(fā)生機(jī)率為61.53％(16/26)；視網(wǎng)膜病

8、變包括神經(jīng)節(jié)細(xì)胞排列紊亂、視網(wǎng)膜充血等，發(fā)生機(jī)率為73.08％(19/26)。 7.石蠟切片上測量LGR4-/-與LGR4+/+小鼠前房角度、視網(wǎng)膜神經(jīng)纖維層厚度，計數(shù)單位長度神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)量并比較 測量結(jié)果顯示相較于LGR4+/+小鼠，LGR4-/-小鼠前房角度明顯變小，視網(wǎng)膜神經(jīng)纖維層厚度變薄，單位長度神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)量增加，差異均有顯著性。 結(jié)論： LGR4受體在小鼠眼部有廣泛表達(dá)，在敲除LGR4基因后，