血友病A患者凝血因子Ⅷ抑制物的形成及其危險(xiǎn)因素分析.pdf

1、背景 血友病A(hemophiliaA，HA)是一種由于凝血因子Ⅷ(Factor Ⅷ，F(xiàn)Ⅷ)基因缺陷所致的出血性疾病，是最常見(jiàn)的X染色體隱性遺傳病。在男性中的發(fā)病率約1/5000-10000。主要臨床表現(xiàn)是反復(fù)發(fā)生異常出血，以關(guān)節(jié)和肌肉出血最常見(jiàn)，主要依靠反復(fù)輸注FⅧ制劑進(jìn)行替代治療，以達(dá)到治療和預(yù)防出血的目的。但反復(fù)輸注FⅧ制劑可導(dǎo)致體內(nèi)產(chǎn)生FⅧ抑制物，這已成為治療HA的最嚴(yán)重并發(fā)癥之一。據(jù)國(guó)外報(bào)道，F(xiàn)Ⅷ抑制物的發(fā)生率在5％

2、～30％。FⅧ抑制物的形成機(jī)制仍不明確，可能與環(huán)境因素、基因因素和免疫因素等有關(guān)。我國(guó)HA患者抑制物的發(fā)生率尚不清楚，對(duì)抑制物形成的危險(xiǎn)因素尚無(wú)相關(guān)研究，尤其是抑制物形成的基因因素。目前國(guó)內(nèi)醫(yī)師普遍缺乏對(duì)FⅧ抑制物的認(rèn)識(shí)，臨床漏診率高。因此，調(diào)查抑制物的發(fā)生情況，探索其形成的危險(xiǎn)因素，對(duì)于抑制物形成的防治具有重要的理論意義和現(xiàn)實(shí)意義。 目的 在血友病A患者中篩查FⅧ抑制物，并探討抑制物形成的環(huán)境因素以及基因缺陷與抑制物形

3、成的關(guān)系。 方法 1．連續(xù)收集2003年4至2007年4月北京協(xié)和醫(yī)院門診和住院的HA患者107例，新征集HA患者158例，共265例。 2．采用一期法檢測(cè)FⅧ活性(FⅧ：C)，采用Bethesda法篩查FⅧ抑制物。 3．采用LD-PCR方法檢測(cè)內(nèi)含子22倒位，雙管多重PCR方法檢測(cè)內(nèi)含子1倒位。 4．基因組DNA測(cè)序采用雙脫氧核酸終止法。 結(jié)果 1．265例HA患者中，22例FⅧ

4、抑制物陽(yáng)性，檢出率為8.3％。其中低反應(yīng)(抑制物滴度<5BU)19例，占86.4％，高反應(yīng)3例，占13.6％。 2．265例HA患者中，重型(FⅧ：C<1％)患者97例，占36.7％，中型(FⅧ：C1-5％)113例，占42.6％，輕型(FⅧ：C>5％)55例，占20.7％。重型HA患者抑制物陽(yáng)性的檢出率為11.3％，高于輕、中型患者(7.2％和6.2％)。 3.22例FⅧ抑制物陽(yáng)性者中，中位年齡28歲(6歲至68歲)

5、，中老年患者(>50歲)的檢出率較高，達(dá)50％，明顯高于其他年齡組。 4.新征集的158例HA患者中，輸注FⅧ制劑的頻率大于12次/年的患者組，抑制物的檢出率為12.8％，明顯高于輸注頻率小于12次/年的患者組(5.8％)；初次輸注FⅧ制劑的年齡在6個(gè)月以內(nèi)患者組，抑制物陽(yáng)性1例(8.3％)，其抗體滴度高達(dá)80BU，6-12月及大于12月患者組的抑制物檢出率分別為4.8％和8.0％；有持續(xù)輸注FⅧ史的患者組，抑制物的檢出率為28

6、.3％，明顯高于無(wú)持續(xù)輸注組(1.6％)；有多品牌FⅧ制劑或多種血制品輸注史的患者，其抑制物的檢出率升高(9.3％比3.9％)。 5.新征集的158例來(lái)自無(wú)關(guān)家系的HA患者，內(nèi)含子22倒位60例，占37.9％，內(nèi)含子1倒位2例，占1.26％；93例重型HA中有44例為內(nèi)含子22倒位，占47.3％。 6.隨機(jī)抽取18例倒位陰性的HA(9例重型和9例輕中型，5例合并抑制物陽(yáng)性)進(jìn)行測(cè)序，均找到基因突變，且彼此不同。突變類型中

7、，小缺失8例(44.4％)，點(diǎn)突變7例(38.9％)，插入突變2例(11.1％)，剪接突變1例(5.5％)。按引起三聯(lián)體密碼效應(yīng)不同，其中14例為錯(cuò)義突變，4例為無(wú)義突變。 7.18例測(cè)序結(jié)果經(jīng)比對(duì)，有8種為新發(fā)現(xiàn)的突變，占44.4％，突變位點(diǎn)分別是：①在密碼子183和189各插入1堿基A；②在密碼子297-8中缺失4個(gè)堿基4(AACA)；③在密碼子710中缺失1堿基G；④在密碼子1442缺失2個(gè)堿基AG；⑤在密碼子1590缺失

8、1堿基A；⑥Y1837C；⑦在密碼子2304-7缺失9個(gè)堿基(CTACCTTCG)；⑧在密碼子51-2缺失4個(gè)堿基(TTGT)。 8.60例內(nèi)含子22倒位陽(yáng)性患者中，抑制物陽(yáng)性2例(3.3％)，均為重型；2例內(nèi)含子1倒位患者中無(wú)1例抑制物陽(yáng)性。 9.4例無(wú)義突變中，3例為重型，突變發(fā)生于3個(gè)不同的FⅧ活性結(jié)構(gòu)域，分別為C1、C2和A3結(jié)構(gòu)域，發(fā)生在C1活性結(jié)構(gòu)域的患者抑制物陽(yáng)性。1例為中型，突變發(fā)生在非活性的A1結(jié)構(gòu)域；

9、14例錯(cuò)義突變中，重型占6例，半數(shù)合并抑制物陽(yáng)性。另8例為輕中型，僅1例抑制物陽(yáng)性。 結(jié)論 1.我國(guó)FⅧ抑制物檢出率為8.3％，略低于國(guó)外報(bào)道。 2.FⅧ抑制物的形成可能與患者年齡、病情的嚴(yán)重程度、輸注FⅧ頻率、初始年齡以及給藥模式等有關(guān)。 3.內(nèi)含子22倒位是重型血友病的首位病因，其次是內(nèi)含子1倒位。 4.HA基因突變類型以小缺失和點(diǎn)突變?yōu)槌Ｒ?jiàn)。 5.基因突變類型和突變位點(diǎn)不僅與HA的嚴(yán)