白細(xì)胞介素18和γ-干擾素聯(lián)合檢測鑒別診斷結(jié)核性和惡性胸腔積液的價值和臨床意義.pdf

1、一、課題背景及目的 滲出性胸腔積液在臨床上以結(jié)核性和惡性胸腔積液最為多見。結(jié)核性和惡性胸腔積液治療和預(yù)后迥然不同，故正確鑒別非常重要。結(jié)核性胸腔積液和惡性胸腔積液細(xì)胞學(xué)檢查往往都是以淋巴細(xì)胞占優(yōu)勢的滲出性胸水，而腫瘤細(xì)胞的檢出率較低，胸水直接檢查和Ziehl-Neelsen染色法需要結(jié)核桿菌數(shù)在10，000/mL，因此，靈敏度很低(0-1％)。盡管結(jié)核桿菌培養(yǎng)具有更高的靈敏度(11-50％)，但需要2-4周的培養(yǎng)時間。開胸胸膜活

2、檢為確定胸腔積液病因的“金標(biāo)準(zhǔn)”，在直視下可發(fā)現(xiàn)可疑病灶，并能選擇性的進(jìn)行活檢，特異性和敏感性均高于其他任何檢查方法，但此項檢查創(chuàng)傷較大，手術(shù)風(fēng)險較高。因此尋找敏感性和特異性更高的無創(chuàng)輔助診斷方法鑒別診斷結(jié)核性胸腔積液和惡性胸腔積液具有重要的臨床意義。白細(xì)胞介素18(IL-18)和γ-干擾素(IFN-γ)是多效能的細(xì)胞因子，在Th1和Th2細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)過程中均發(fā)揮著重要作用。最近研究發(fā)現(xiàn)IL-18和IFN-γ與結(jié)核性胸腔積液及惡性胸腔積

3、液的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切，本研究就聯(lián)合檢測結(jié)核性和惡性胸腔積液中病人胸水及血清標(biāo)本和正常人血清標(biāo)本中白細(xì)胞介素18和γ-干擾素濃度，分析比較IL-18和IFN-γ在結(jié)核性和惡性胸腔積液中的鑒別診斷價值及臨床意義。 二、材料與方法 胸水及血清標(biāo)本來自浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院呼吸內(nèi)科、杭州市紅十字會醫(yī)院結(jié)核病科及嵊州市人民醫(yī)院呼吸內(nèi)科2007年6月至2008年1月已經(jīng)確診的34例結(jié)核性胸腔積液患者和38例惡性胸腔積液患者，另

4、外18例正常血清標(biāo)本來自健康自愿者及正常獻(xiàn)血員。胸腔積液患者于住院24小時內(nèi)，未經(jīng)過任何治療前，經(jīng)過患者同意，采用標(biāo)準(zhǔn)胸腔穿刺術(shù)抽取胸水后，留取10ml新鮮胸水及同時采取5ml靜脈血2000r/min離心15分鐘，收集上清液置于-20°C冰箱保存，待測定IL-18和IFN-γ。 人白細(xì)胞介素-18(IL-18)測定采用雙抗體夾心生物素化酶復(fù)合物一酶聯(lián)免疫吸附試驗(雙抗體夾心ABC-ELISA法)。用抗人IL-18單抗包被于酶標(biāo)板

5、上，標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的IL-18與單抗結(jié)合，加入生物素化的抗人IL-18，形成免疫復(fù)合物連接在板上，辣根過氧化酶標(biāo)記物的抗生蛋白鏈菌素(streptavidin)與生物素結(jié)合，加入酶底物鄰苯二胺(OPD)，出現(xiàn)黃色，加終止液硫酸，顏色變深，在492nm處測吸光度值(OD值)，IL-18濃度與OD值成正比，可以通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中IL-18濃度。γ-干擾素(IFN-γ)測定采用雙抗體夾心生物素化酶復(fù)合物-酶聯(lián)免疫吸附試驗(雙抗體夾心A

6、BC-ELISA法)。用抗人IFN-γ，單抗包被于酶標(biāo)板上，標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的IFN-γ與單抗結(jié)合，加入生物素化的抗人IFN-γ，形成免疫復(fù)合物連接在板上，辣根過氧化酶標(biāo)記物的抗生蛋白鏈菌素(Streptavidin)與生物素結(jié)合，加入酶底物鄰苯二胺(OPD)，出現(xiàn)黃色，加終止液硫酸，顏色變深，在492nm處測吸光度值(OD值)，IFN-γ 濃度與OD值成正比，可以通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中IFN-γ濃度。用SPSS11.5 fo

7、r Windows統(tǒng)計軟件包進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析處理，P<0.05差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 三、結(jié)果 正常人組血清IL-18的濃度為(152±58 ng/L)，結(jié)核性胸腔積液患者組血清IL-18的濃度為(190±51ng/L)，惡性胸腔積液組患者血清IL-18的濃度為(159±53 ng/L)，結(jié)核性組血清IL-18的濃度高于正常人組血清IL-18的濃度及惡性胸腔積液組患者血清IL-18的濃度，但結(jié)核性組血清IL-18與正常人組血清

8、IL-18比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t值1.66，P>0.05)，結(jié)核性組血清IL-18與惡性胸腔積液組患者血清IL-18差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t值1.83，P>0.05)，惡性胸腔積液組患者血清IL-18與正常人組血清IL-18比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t值0.29，P>0.05)。結(jié)核性胸腔積液患者組胸水IL-18的濃度為(1111±190ng/L)，惡性胸腔積液組患者胸水IL-18的濃度為(316±162ng/L)，兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(

9、t值14.1，P<0.01)。 正常人組血清IFN-γ的濃度為(42±26 ng/L)，結(jié)核性胸腔積液患者組血清IFN-γ的濃度為(70±72ng/L)，惡性胸腔積液組患者血清IFN-γ的濃度為(53±43ng/L)。結(jié)核性組血清IFN-γ的濃度高于正常人組血清IFN-γ的濃度及惡性胸腔積液組患者血清IFN-γ的濃度，但結(jié)核性組血清IFN-γ與正常人組血清IFN-γ比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t值1.02，P>0.05)，結(jié)核性組血清

10、IFN-γ與惡性胸腔積液組患者血清IFN-γ差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t值0.92，P>0.05)，惡性胸腔積液組患者血清IFN-γ與正常人組血清IFN-γ比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t值0.5 9，P>0.05)。結(jié)核性胸腔積液患者組胸水IFN-γ的濃度為(1008±309ng/L)，惡性胸腔積液組患者胸水(31±10ng/L)。兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t值14.2，P<0.01)。 四、結(jié)論 結(jié)核性、惡性胸腔積液及正常人三組血清