連續(xù)性血液透析濾過對多器官功能障礙犬器官功能和細(xì)胞因子的影響及作用機(jī)制研究.pdf

1、目的：復(fù)制符合多器官功能障礙綜合征(multiple organ dysfunction syndrorne，MODS)發(fā)病因素，病理過程和臨床特征的標(biāo)準(zhǔn)化動物模型。 方法：15只雄性Beagle犬，體重14～16.3kg(由新疆醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供)。實(shí)驗(yàn)前禁食24h，正常飲水。動物戊巴比妥鈉30mg/kg靜脈麻醉后，稱重，固定，消毒，行氣管插管術(shù)，管經(jīng)口插入深26cm，插管成功后接呼吸機(jī)輔助呼吸，模式為容量控制通氣(CM

2、V)，參數(shù)為潮氣量15ml/kg、呼吸頻率為20～25次/min、呼氣末正壓(PEEP)2～3cmH2O；行右股動脈穿刺術(shù)，置入5F動脈留置針，連接心功能監(jiān)護(hù)儀行血流動力學(xué)監(jiān)測；行左股靜脈穿刺術(shù)，置入7F導(dǎo)管用于持續(xù)靜點(diǎn)戊巴比妥鈉2～4mg/kg/h和留取血標(biāo)本；分別采用左頸內(nèi)靜脈和右股靜脈留置11F單針雙腔導(dǎo)管建立血管通路，應(yīng)用CVVHDF治療。所有導(dǎo)管直接插入，切口行外科縫合。間斷用肝素鈉鹽水沖導(dǎo)管預(yù)防凝血。留置導(dǎo)尿管，心電監(jiān)護(hù)，監(jiān)

3、測肛溫，必要時(shí)使用電熱毯保持體溫在38～39℃。 術(shù)后30分鐘，采用Wiggers法[1]造成失血性休克，維持平均動脈壓(MAP)6.0-7.3kPa(45-54mmHg)之間1小時(shí)。休克終點(diǎn)，經(jīng)頸靜脈快速回輸失血和兩倍失血量的林格氏液。回輸畢MAP和心排指數(shù)(CI)均能恢復(fù)至傷前水平。復(fù)蘇12h后由靜脈持續(xù)12h滴入內(nèi)毒素(大腸桿菌OIllB4內(nèi)毒素，第二軍醫(yī)大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)部微生物學(xué)教研室提供)1.5mg/kg。觀察實(shí)驗(yàn)動物犬的

4、癥狀、體征、生存率、臟器功能指標(biāo)，如丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、血尿素氮(BUN)和血肌酐(Cr)與組織病理變化。 結(jié)果：實(shí)驗(yàn)前MAP分別是114.2±13.2mmHg。造成失血性休克后MAP降至54.8±6.1mmHg，復(fù)蘇后恢復(fù)至正常90％左右。輸入內(nèi)毒素后，MAP呈進(jìn)行性下降，明顯低于實(shí)驗(yàn)前(P<0.01)。休克期PaO2和PaCO2降低，與傷前差別顯著(P<0.05)； 輸入內(nèi)毒素后

5、，PaO2呈進(jìn)行性降低，PaCO2呈明顯升高趨勢。在MODS病變發(fā)展過程中，實(shí)驗(yàn)動物在二次打擊后癥狀、體征與功能指標(biāo)(ALT、AST、BUN及Cr)均發(fā)生明顯變化，肝、腎等臟器病理損傷明顯。結(jié)論：該模型的致傷因素、發(fā)病過程、臨床特征及診斷標(biāo)準(zhǔn)都與臨床典型的雙相遲發(fā)MODS相似，是目前比較理想的和適用于臨床防治研究的MODS動物模型。 目的：觀察連續(xù)性血液透析濾過(CWHDF)對多器官功能障礙綜合征(MODS)犬重要器官功能和組織

6、病理的影響，探討CVVHDF治療MODS的可能機(jī)制。 方法：15只Beagle犬采用失血性休克+復(fù)蘇灌注+內(nèi)毒素血癥復(fù)制MODS模型[2]，隨機(jī)分為CVVHDF組(n=8)和MODS組(n=7)，CVVHDF組在內(nèi)毒素注射完畢后給于CVVHDF治療12小時(shí)，MODS組不給CVVHDF治療。檢測各時(shí)間點(diǎn)動脈血氧分壓(PaO2)、動脈血二氧化碳分壓(PaCO2)、血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、肌酐(C

7、r)、血尿素氮(BUN)及血漿內(nèi)毒素(LPS)的水平，同時(shí)觀察兩組動物肝、腎組織病理形態(tài)學(xué)改變。 結(jié)果：CVVHDF組治療過程中，MAP基本保持在正常水平，尤其在T5、T6及T7時(shí)間點(diǎn)顯著高于MODS組(P<0.01)；PaO2逐漸升高，與MODS組在T4、T5、T6及T7時(shí)間點(diǎn)相比相差顯著(P<0.05)；血清肌酐(Cr)、血尿素氮(BUN)及血漿內(nèi)毒素(LPS)水平較MODS組降低(P<0.05)。傷后兩組動物肝、腎組織均可

8、見不同程度的充血、灶狀與大片狀壞死、出血及炎性細(xì)胞浸潤。CVVHDF組器官病變較MODS組明顯減輕。 結(jié)論：連續(xù)性血液透析濾過能明顯改善內(nèi)毒素誘導(dǎo)的低血壓，提高動脈血氧分壓，有效清除血漿內(nèi)毒素，改善腎功能，減輕肝、腎組織病理損害。 目的：觀察連續(xù)性血液透析濾過(CVVHDF)對多器官功能障礙綜合征(MODS)犬器官功能和細(xì)胞因子的影響，探討CVVHDF治療MODS的可能機(jī)制。 方法：15只Beagle犬采用失血

9、性休克+復(fù)蘇灌注+內(nèi)毒素血癥復(fù)制MODS模型，隨機(jī)分為CVVHDF組(n=8)和MODS組(n=7)，CVVHDF組在內(nèi)毒素注射完畢后給于CVVHDF治療12小時(shí)，MODS組不給CWHDF治療。免疫組織化學(xué)分析兩組肝、腎組織中IL-6、IL-10陽性蛋白表達(dá)。半定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)測定兩組肝、腎組織中IL-6、IL-10 mRNA水平。ELISA方法檢測血漿IL-6、IL-10濃度。 結(jié)果：CVVHDF治療開

10、始后血漿IL-6、IL-10明顯下降，在內(nèi)毒素注射完畢后3h(T4)、6h(T5)、9h(T6)及2h(T7)時(shí)間點(diǎn)顯著低于MODS組(P<0.01)。超濾液中能檢測出IL-6，IL-6篩選系數(shù)(SC)為0.27±0.13。超濾液中未能檢測出IL-10。免疫組織化學(xué)分析兩組肝、腎組織中IL-6、IL-10陽性蛋白表達(dá)，在MODS組IL-6陽性蛋白表達(dá)水平顯著增高，而在CVVHDF組IL-10陽性蛋白表達(dá)水平顯著增高。應(yīng)用半定量RT-PC

11、R方法測定肝腎組織IL-6、IL-10 mRNA表達(dá)水平，在MODS組IL-6 mRNA表達(dá)水平顯著高于正常水平和CWHDF組(P<0.01)，而在CVVHDF組IL-10mRNA表達(dá)水平顯著高于正常水平和MODS組(P<0.01)。 結(jié)論：CVVHDF能有效清除循環(huán)中細(xì)胞因子IL-6、IL-10，有助于重建機(jī)體免疫系統(tǒng)內(nèi)穩(wěn)狀態(tài)。超濾液中能檢測出IL-6，表明CWHDF治療通過對流機(jī)制可以有效清除血漿中的IL-6。超濾液中未能檢