蒲葵子抗癌有效部位的毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：從蒲葵子的95％乙醇提取液的乙酸乙酯部位純化出抗癌有效部位，對其進(jìn)行毒理學(xué)研究，確定毒性范圍與毒副作用，為進(jìn)一步臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：1.將蒲葵子用95%乙醇進(jìn)行回流提取后，分別用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇進(jìn)行部位分離。2.分離后幾大部位提取物采用MTT法進(jìn)行初步抗癌有效部位體外細(xì)胞藥效篩選，并確定有效部位，以進(jìn)行進(jìn)一步純化。3.對確定的有效部位乙酸乙酯部位，利用聚酰胺柱層析法對其進(jìn)行純化，得到黃酮類。4.急性毒性

2、實(shí)驗(yàn)，選用健康昆明種小鼠20只，雌雄各半，以最大濃度最大給藥體積（11g/kg體重）灌胃后，連續(xù)觀察兩周，記錄中毒以及死亡情況。5.長期毒性實(shí)驗(yàn)，健康SD大鼠120只，按體重隨機(jī)分為4組（每組30只，雌雄各半），劑量組給藥劑量分別為0.325、0.65、1.30g/kg體重，空白組給予純凈水，經(jīng)口灌胃給藥13周，13周后每組均處死2/3大鼠進(jìn)行血液、生化、病理等指標(biāo)測定。剩余大鼠于停藥4周后處死，方法及觀察指標(biāo)同前。6.遺傳毒性試驗(yàn)，包

3、括微量波動試驗(yàn)和小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn)。微量波動試驗(yàn)，受試物分別設(shè)500，50，5，0.5，0.025μg/ml五個(gè)不同濃度，同時(shí)設(shè)立未處理對照、陰性對照和陽性對照。采用96孔板微量滴定法，在加S9和不加S9條件下進(jìn)行，經(jīng)37℃培養(yǎng)5天后觀察結(jié)果，實(shí)驗(yàn)重復(fù)兩次。小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn)，健康昆明種小鼠60只，隨機(jī)分為6組（每組10只，雌雄各半），設(shè)11、5.5、2.75、1.38 g/kg體重四個(gè)劑量組，同時(shí)設(shè)立陽性對照組（環(huán)

4、磷酰胺）和空白對照組(純凈水)，灌胃給藥，給藥組和空白對照組每天給藥一次,連續(xù)給藥4天，第5天收集骨髓細(xì)胞，陽性對照組為腹腔注射環(huán)磷酰胺一次，給藥后24小時(shí)收集骨髓細(xì)胞，涂片、染色、觀察結(jié)果。
　　結(jié)果：1.本實(shí)驗(yàn)用一般中藥化學(xué)提取方法，對蒲葵子有效成分進(jìn)行提取與粗分，用MTT體外藥效篩選結(jié)果表明，乙酸乙酯效果明顯，即采用聚酰胺層析法，得到黃酮類。2.黃酮類進(jìn)行臨床前安全性評價(jià)結(jié)果：①急性毒性實(shí)驗(yàn)。有效成分毒性較小，MTD大于11

5、g/kg。②長期毒性實(shí)驗(yàn)。給藥13周后，各組織器官無異常改變，血液檢查與生化指標(biāo)正常。停藥4周后，各組織器官亦正常。大體解剖未發(fā)現(xiàn)異常。③遺傳毒性實(shí)驗(yàn)：微量波動試驗(yàn)，各濃度受試物無論加S9或不加S9，各板中變色孔數(shù)經(jīng)X2檢驗(yàn)，與陰性對照組相比，無顯著性差異（P>0.05）；與陽性對照組相比，有顯著性差異（P<0.001）。小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn)，雌、雄各給藥組與陰性對照組相比，無顯著性差異（P>0.05）；與陽性對照組相比，有顯著