20味沉香丸對(duì)低氧條件下大鼠HIF-1α及EPO的干預(yù)作用.pdf

1、研究背景及目的:
　　高原環(huán)境惡劣，其中低壓低氧、寒冷、干燥、紫外線輻射強(qiáng)和風(fēng)速大等特點(diǎn)都對(duì)人的生理功能會(huì)產(chǎn)生明顯影響，易引起高原病的發(fā)生。當(dāng)人進(jìn)入高原地區(qū)后，由于大氣壓低，氧分壓隨之下降，氧供不足，機(jī)體就會(huì)出現(xiàn)代償性生理反應(yīng)包括肺通氣增大，心率和心輸出量提高，氧傳遞速度和效率增大等，有利于機(jī)體攝取更多的氧[1]。其中血液系統(tǒng)的變化甚為明顯，主要表現(xiàn)為骨髓造血增強(qiáng)、紅細(xì)胞和血紅蛋白增多，氧解離曲線右移，從而增加氧的運(yùn)輸和血紅蛋白釋

2、放氧。但是在高海拔地區(qū)時(shí)間越長(zhǎng)，紅細(xì)胞數(shù)、血紅蛋白含量、紅細(xì)胞壓積就會(huì)增加過(guò)度，使得全血比黏度、血漿比黏度增大，血流速度減慢，反而影響氧的運(yùn)輸，加重組織缺血、缺氧[,2]。這與低氧誘導(dǎo)因子-1α（hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α）和促紅細(xì)胞生成素（erythropoietin,EPO）表達(dá)過(guò)高有關(guān)。
　　高原低氧可刺激HIF-1α和EPO的產(chǎn)生，從而提高紅細(xì)胞數(shù)量和血紅蛋白的濃度，以增加氧的運(yùn)輸

3、與釋放，這在高原缺氧中具有重要意義[3][4]。作為調(diào)控氧穩(wěn)態(tài)的主要轉(zhuǎn)錄因子HIF-1α對(duì)維持機(jī)體氧平衡和適應(yīng)低氧環(huán)境具有關(guān)鍵作用。在常氧環(huán)境條件下,HIF-1α蛋白持續(xù)合成并被不斷降解，在低氧環(huán)境條件下,HIF-1α蛋白降解受阻，并在HIF-1α和HIF-1β轉(zhuǎn)錄因子二聚化作用下形成HIF-1[5][6]。HIF-1能作用于其靶基因發(fā)揮氧調(diào)節(jié)作用,維持機(jī)體在低氧條件下的生存。EPO是一種糖蛋白激素，它主要作用于紅系定向祖細(xì)胞膜上的紅細(xì)

4、胞生成素受體，促進(jìn)這些定向祖細(xì)胞加速增殖分化，加快紅細(xì)胞成熟，防止細(xì)胞凋亡(Apoptosis)。當(dāng)腎臟氧感受器受到低氧刺激后，腎小管間質(zhì)纖維細(xì)胞分泌EPO，并刺激骨髓的原始細(xì)胞，促使核紅細(xì)胞的分裂，加速紅細(xì)胞的成熟，因而血液中紅細(xì)胞數(shù)增多。其結(jié)果，一方面增加血紅蛋白的攜氧能力，提高氧傳遞，改善組織缺氧；另一方面如果血細(xì)胞比容超過(guò)60％時(shí)，則顯著增加血液黏滯度，血流緩慢，血液在微循環(huán)淤滯，甚至發(fā)生血栓，使氧的傳遞受阻，于是加重了組織缺氧

5、。
　　二十味沉香丸是在八味沉香丸的基礎(chǔ)上，通過(guò)添加十二味藥而成,在治療心腦血管疾病中成為首選的藏藥，但缺乏實(shí)驗(yàn)依據(jù)[11][13]16][17]。本研究旨在探討二十味沉香丸對(duì)高原低氧大鼠血清中低氧誘導(dǎo)因子-1α（HIF-1α）和促紅細(xì)胞生成素（EPO）表達(dá)的影響，從而使機(jī)體能更好地適應(yīng)低氧低壓環(huán)境。
　　材料和方法:
　　將165只雄性Wistar大鼠由成都(海拔540m)運(yùn)至西寧(海拔2260m)，隨機(jī)分為平原對(duì)照

6、組、高原對(duì)照組和高原給藥組，平原對(duì)照組(n=15)到達(dá)西寧立刻從腹主動(dòng)脈測(cè)定大鼠血液中血紅蛋白（Hb）和血細(xì)胞比容（Hct），全血經(jīng)離心分離血清并于液氮儲(chǔ)存；將高原對(duì)照組(n=75)和高原給藥組(n=75)大鼠再運(yùn)至青海果洛州花石峽鎮(zhèn)(海拔4500m)，分為5小組，每小組15只，分別于1、3、7、15、30日測(cè)定該兩組血紅蛋白和血細(xì)胞比容，采集外周血并分離血清液氮儲(chǔ)存。應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)大鼠血清中HIF－1α和EPO含

7、量；應(yīng)用蛋白質(zhì)印跡法（Western blot）檢測(cè)大鼠腎組織中HIF-1α和EPO蛋白表達(dá)水平，應(yīng)用SPSS10.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，進(jìn)行多組方差分析檢驗(yàn)。
　　結(jié)果:
　　高原對(duì)照組大鼠血液中Hb和Hct含量明顯升高，于第3天起與平原對(duì)照組相比出現(xiàn)明顯差異，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，高原給藥組Hb和Hct上升不明顯，相比平原對(duì)照組，兩組無(wú)差異；高原對(duì)照組大鼠組血清HIF－1α和EPO表達(dá)較平原對(duì)照組明顯升