樺褐孔菌多糖對(duì)感染弓形蟲小鼠細(xì)胞免疫的影響及機(jī)理的研究.pdf

1、尋找樺褐孔菌的有效抗弓形蟲提取物，研究其對(duì)感染弓形蟲小鼠細(xì)胞免疫的影響，并對(duì)其抗蟲機(jī)理進(jìn)行研究，通過對(duì)樺褐孔菌治療弓形蟲感染疾病的療效及機(jī)理的研究為弓形蟲疾病的治療及中藥資源的開發(fā)利用提供理論參考。本研究采用不同提取方法，制備樺褐孔菌三種提取物，分別為水煎劑、粗多糖、白樺脂醇，弓形蟲感染正常vero細(xì)胞和健康小鼠建立體外及體內(nèi)感染模型，通過體外和體內(nèi)抗弓形蟲試驗(yàn)，篩選出樺褐孔菌的有效抗蟲提取物及其最佳治療劑量；并利用苯酚硫酸法測(cè)定該提取

2、物的含量；用 ELASA法檢測(cè)樺褐孔菌多糖治療弓形蟲感染前后細(xì)胞因子伽馬干擾素（IFN-γ）和白細(xì)胞介素-2（IL-2）；利用流式測(cè)定技術(shù)測(cè)定小鼠脾懸液中T淋巴細(xì)胞亞群CD4+、CD8+的含量；采用半定量PCR法檢測(cè)感染小鼠各臟器中弓形蟲基因拷貝數(shù)；采用基因芯片技術(shù)，觀察樺褐孔菌多糖對(duì)弓形蟲感染小鼠基因表達(dá)譜的影響。
　　結(jié)果：體外試驗(yàn)中三種提取物均能抑制弓形蟲的生長(zhǎng)和繁殖，其中多糖組的抗蟲效果較其他兩組明顯，但試藥組均弱于陽(yáng)性對(duì)

3、照組；在體內(nèi)染蟲試驗(yàn)中，樺褐孔菌多糖組小白鼠平均存活天數(shù)與陽(yáng)性對(duì)照組比較無顯著性差異，表明樺褐孔菌多糖體內(nèi)抗蟲效果較好。樺褐孔菌粗多糖得率為17％，樺褐孔菌菌核中多糖含量為2.07%，樺褐孔菌粗多糖中的多糖含量為22.43%。各試驗(yàn)組小鼠存活天數(shù)與感染對(duì)照組比較差異均顯著（P<0.05）；樺褐孔菌多糖中劑量組小鼠存活率最高，且存活時(shí)間最長(zhǎng)；樺褐孔菌多糖的高、中劑量組IFN-γ水平顯著高于其他各組(P<0.01)，高劑量組IL-2水平與其

4、他各組比較差極顯著(P<0.01)；除感染組外其余各組IFN-γ、IL-2均在第6天出現(xiàn)峰值。樺褐孔菌多糖組中CD4+ T細(xì)胞百分?jǐn)?shù)及CD4+／CD8+T細(xì)胞比例與其他三組比較差異極顯著（P＜0.01）；感染對(duì)照組CD8+T細(xì)胞百分?jǐn)?shù)顯著高于樺褐孔菌多糖組（P＜0.05），與其他兩組比較差異極顯著（P＜0.01）。樺褐孔菌多糖治療組小鼠的肝臟、脾臟、肺臟中的蟲體拷貝數(shù)顯著低于感染對(duì)照組。經(jīng)SOM分析篩選出了樺褐孔菌多糖治療組及陽(yáng)性治療組

5、的有效差異基因，并對(duì)其進(jìn)行功能注釋，分析出了兩種藥物治療弓形蟲的主要原因。
　　結(jié)論：樺褐孔菌多糖具有體外抗蟲作用，效果較陽(yáng)性藥物弱，但體內(nèi)抗蟲效果好略優(yōu)于陽(yáng)性藥物。樺褐孔菌多糖可有效延長(zhǎng)感染弓形蟲小白鼠的存活時(shí)間，其2mg/10g體重劑量為抗弓形蟲感染的最佳治療量。該劑量可使小白鼠血清IFN-γ、IL-2值升高到適當(dāng)水平,有效治療弓形蟲感染對(duì)小白鼠的傷害，可有效調(diào)節(jié)感染弓形蟲小白鼠的CD4+T細(xì)胞百分?jǐn)?shù)及CD4+/CD8+比例，