杭白菊乙酸乙酯提取物對大鼠實驗性心律失常的影響及其機制.pdf

1、背景：急性心肌梗死是常見的心臟急癥之一，其最有效的治療是盡早恢復(fù)冠脈血流，但血流的再灌注?？僧a(chǎn)生再灌注損傷，發(fā)生再灌注心律失常，導(dǎo)致心性猝死。目前臨床上用于治療心律失常的藥物都是通過改變心肌細(xì)胞的某個電生理特性從而發(fā)揮抗心律失常的作用，有相當(dāng)大的毒副作用，至今臨床上仍缺少療效高、毒性低并可長期使用的抗心律失常藥。 杭白菊(Chrysanthemum Morifolium Ramat)是多年生草本菊科植物菊的頭狀花序，為浙八味之一

2、，有清熱、平肝、明目功能，是衛(wèi)生部首批批準(zhǔn)的藥食同源的道地藥材。以往的研究表明，杭白菊可以增加實驗動物的冠脈流量，顯著增加冠狀動脈粥樣硬化兔心的冠脈流量，對抗缺血再灌注引起的離體大鼠心肌收縮功能及冠脈流量的下降。臨床研究表明，杭白菊制劑對心絞痛的總有效率達(dá)83.0％，能改善冠心病患者的心電圖異常，減輕慢性冠脈供血不足。然而，未有文獻(xiàn)涉及杭白菊對心律失常影響的研究。本論文在整體動物、離體器官、以及組織和細(xì)胞水平，研究杭白菊乙酸乙酯提取物(

3、ethyl acetate extract from Chrysanthemum Morifolium Ramat，CME)對心律失常的影響及其相關(guān)機制。 目的： 1、應(yīng)用整體動物烏頭堿誘發(fā)心律失常模型初步探討杭白菊對實驗性心律失常的影響。 2、應(yīng)用Langendorff離體心臟缺血再灌注模型觀察CME對缺血再灌注心肌易損性的影響，并探討其機制。 3、應(yīng)用常規(guī)微電極技術(shù)探討CME對大鼠心肌動作電位的影響及

4、其可能的機制。 方法： 1、烏頭堿誘發(fā)的大鼠心律失常模型 Sprague-Dawley大鼠腹腔注射1.2 g／kg烏拉坦麻醉。仰臥位固定，暴露股靜脈，置留置針，采用標(biāo)準(zhǔn)肢體Il導(dǎo)聯(lián)記錄心電圖，分別靜脈注射CME(1mg／k,4mg／kg，8mg/kg)，生理鹽水(1.4 ml／kg)20min后注入烏頭堿30μg／kg，5s內(nèi)注完，觀察指標(biāo)：室性早搏(ventricular prematurebeat，VPB)，

5、室性心動過速(ventricular tachycardia，VT)，心室顫動(ventricular fibrillation，VF)的發(fā)生次數(shù)和持續(xù)時間。 2、心律失常評分法 Score=(log10 VPBs)+2(log10 number of episodes of VT)+2[(log10 number of episodesof VF)+(log10 total duration of VF)]，用于對心律

6、失常嚴(yán)重程度進(jìn)行定量分析。 3、離體心臟缺血再灌注模型 SD大鼠麻醉斷頭后開胸取出心臟，迅速轉(zhuǎn)移、固定于Langendorff灌流裝置，以5％O2+5％CO2混合氣體飽和的K-H液，行76mmHg恒壓灌流。用5-0醫(yī)用無損傷縫合線穿過冠狀動脈左前降支以備結(jié)扎。各組大鼠心臟穩(wěn)定20min后進(jìn)行實驗處理，給藥15min后用縫合線結(jié)扎冠脈行缺血30min，再松開縫合線進(jìn)行再灌注。 4、心肌易損性電生理參數(shù)測定

7、分別于給藥前、缺血前、缺血30min時、再灌注15min時測量舒張期興奮閾(diastolic excitation threshold，DET)、有效不應(yīng)期(effective refractory period，ERP)和心室顫動閾(ventricular fibrillation threshold，VFT)。離體灌流心臟心外膜下插置三對不銹鋼針形電極：左心室水平方向置心電記錄電極一對；右心室垂直方向置起搏電極一對，左心室垂直方向

8、置測試電極一對。另有接地電極一支插入灌流管口附近溶液中。每8個起搏刺激(S1)后插入一個測試刺激(S2)。DET測定采用單個s2脈沖在R波后100ms處以步幅0.01mA遞增測試。以能引起舒張期產(chǎn)生期外興奮收縮的最小電流強度作為DET值。ERP測定采用單個S2脈沖以2倍舒張期興奮閾強度從R波后20ms處始以2ms為步幅作后向移位測試。以能產(chǎn)生期外興奮的R波后最短時距作為ERP值。VFT測定采用串脈沖電擊法。串脈沖由波寬5ms、間隔2ms

9、、強度可調(diào)的10個連續(xù)方波組成，在心外膜電圖R波后30ms開始。串刺激后以心外膜電圖出現(xiàn)連續(xù)6個以上完全不規(guī)則的QRs波作為心室顫動(ventricular fibrillation，VF)指標(biāo)。測試強度從0.5mA開始，步幅為0.2mA。以能引發(fā)VF的最小電流強度作為VFT值。 5、大鼠右室乳頭肌動作電位測定 SD大鼠麻醉斷頭后開胸迅速取出心臟，剪開心臟取出右心室乳頭肌1條，用不銹鋼針固定于灌流肌槽正中，用95％O2+

10、5％CO2飽和的正常K-H液以5ml／min的流速恒流灌流，用刺激器輸出刺激方波起搏乳頭肌以維持其興奮性。采用常規(guī)微電極技術(shù)記錄心肌細(xì)胞動作電位，玻璃微電極內(nèi)充灌3 mol／LKC1溶液，電阻10-20MΩ。操縱微電極三維操縱器緩慢下降玻璃微電極，直至插入心肌細(xì)胞內(nèi)，電信號經(jīng)微電極放大器放大后由RM6240生物信號采集處理系統(tǒng)采集記錄。記錄后分析：靜息電位(resting potential，RP)、動作電位幅度(action pote

11、ntial amplitude，APA)、動作電位0期最大除極速率(maximal velocity of phase 0 depolarization，Vmax)及動作電位復(fù)極化至50％、90％的時程(action potential duration at 50％，90％ repolarization，APD50，APD90)。 結(jié)果： 1、CME對烏頭堿誘發(fā)大鼠心律失常的影響 與對照組比較，各濃度CME組的

12、VPB、VT、VF發(fā)生次數(shù)明顯降低(p＜0.05)，VT、VF持續(xù)時間縮短(p＜0.05)，VPB出現(xiàn)時間顯著延遲，心律失常評分顯著降低(p＜0.05)。2、CME對離體大鼠心臟電生理參數(shù)的影響 2.1.CME對缺血心肌DET的影響 結(jié)果顯示各組缺血30min及再灌注15min后左心室DET無明顯變化，各組間DET比較亦無明顯差異(P＞0.05)。 2.2.CME對缺血心肌ERP的影響 對照組心肌缺血30

13、min后心室肌ERP明顯縮短(P＜0.05)，再灌注15min后ERP有所恢復(fù)。低濃度CME組給藥后ERP無明顯差異，但缺血30 min后ERP較對照組明顯延長(P＜0.05)，再灌注15min后ERP較對照組無顯著變化；中、高濃度CME組給藥15min后ERP均較同組給藥前延長(P＜0.05)，且其給藥15min、缺血30min及再灌注15min ERP均較對照組有明顯延長(P＜0.05)。 2.3.CME對缺血心肌VFT的影

14、響 對照組心肌缺血30min后VFT’減小顯著(P＜0.05)，再灌注15min后有所恢復(fù)。中、高濃度CME組缺血期VFT較對照組顯著增高(P＜0.05)，再灌注期WFT也高于對照組(P＜0.05)，而低濃度組缺血期和再灌注期WFT值與對照組相比無明顯差異，各組給藥前后VFT無明顯差異。 3、CME對大鼠右室乳頭肌動作電位的影響 灌流給藥后15min，記錄細(xì)胞電生理學(xué)參數(shù)。與對照組相比，高濃度CME組明顯降低大鼠

15、右室乳頭肌動作電位Vmax(P＜0.05)，各濃度CME組均可明顯延長動作電位的APD50和APD90(P＜0.05)，但對RP、APA影響不明顯。 結(jié)論： 1、CME可對抗烏頭堿誘導(dǎo)的實驗性心律失常。 2、CME可以提高缺血再灌注心肌的電生理穩(wěn)定性，降低缺血再灌注心肌的易損性。 3、CME的抗心律失常和降低心肌易損性的機制可能涉及其對心肌細(xì)胞Na+內(nèi)流和Na+通道失活動力學(xué)的抑制、以及對復(fù)極化期的鉀離子