三葉因子-3對(duì)甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞增殖及遷徙作用的研究.pdf

1、河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)位論文使用授權(quán)及知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸屬承諾本學(xué)位論文在導(dǎo)師(或指導(dǎo)小組)的指導(dǎo)下，由本人獨(dú)立完成。本學(xué)位論文研究所獲得的研究成果，其知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。河北醫(yī)科大學(xué)有權(quán)對(duì)本學(xué)位論文進(jìn)行交流、公開和使用。凡發(fā)表與學(xué)位論文主要內(nèi)容相關(guān)的論文，第一署名為單位河北醫(yī)科大學(xué)，試驗(yàn)材料、原始數(shù)據(jù)、申報(bào)的專利等知識(shí)產(chǎn)權(quán)均歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。否則，承擔(dān)相應(yīng)法律責(zé)任。研究生簽名：愛軸婦備導(dǎo)師簽章：河北醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本論文是在

2、導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝等內(nèi)容外，文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫的研究成果，指導(dǎo)教師對(duì)此進(jìn)行了審定。本論文由本人獨(dú)立撰寫。文責(zé)自負(fù)：研究生簽名：玲耳圭著導(dǎo)師簽章：伊緝?nèi)罩形恼~因子3對(duì)甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞增殖及遷移作用的研究摘要目的：應(yīng)用小發(fā)卡狀RNA(smallhairpinRNA，shRNA)沉默TFF3(trefoilfactor3)基因表達(dá)，探索其對(duì)人甲狀腺癌乳頭狀癌Kl細(xì)胞增殖和侵

3、襲的影響。方法：采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將靶向TFF3基因的TFF3shRNA瞬時(shí)轉(zhuǎn)染人甲狀腺乳頭狀癌K1細(xì)胞，使相應(yīng)的基因沉默。實(shí)驗(yàn)設(shè)空白對(duì)照組(Con組)、陰性對(duì)照組(ConNC組)和干擾組(TFF3shRNA組)。分別采用逆轉(zhuǎn)錄PCR和實(shí)時(shí)熒光定量PCR、免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)、蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)轉(zhuǎn)染TFF3shRNA后Kl細(xì)胞中TFF3mRNA及其蛋白的表達(dá)；CCK8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)三組細(xì)胞的增殖能力的改變、細(xì)胞劃痕試驗(yàn)檢測(cè)Kl細(xì)胞侵襲能力變化。結(jié)果：

4、1成功將攜有TFF3shRNA基因的重組質(zhì)粒Ca群HSH0180374HⅣmU6轉(zhuǎn)染K1細(xì)胞。2RTPCR和RealtimePCR檢測(cè)TFF3mRNA表達(dá)，TFF3基因沉默后TFF3mRNA表達(dá)降低，是空白對(duì)照組0380I0110倍(pO05)。3TFF3蛋白表達(dá)：Westernblot提示TFF3基因沉默后TFF3蛋白表達(dá)降低595％，與空白對(duì)照組比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(pO01)。4免疫細(xì)胞化學(xué)染色顯示TFF3蛋白位于K1細(xì)胞胞漿

5、，與對(duì)照組相比，干擾組TFF3明顯低表達(dá)。5細(xì)胞劃痕檢測(cè)K1細(xì)胞侵襲能力，干擾組(TFF3shRNA組)K1細(xì)胞的侵襲能力減弱、9劃痕寬度與空自對(duì)照組比較減少5Z’l％j差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(pO01)。6CCK8試劑盒檢測(cè)細(xì)胞增殖能力，通過生長(zhǎng)曲線分析干擾組K1細(xì)胞生長(zhǎng)明顯慢于空白對(duì)照組細(xì)胞(po01)；干擾組(TFF3shRNA組)K1細(xì)胞在6h、12h、24h、36h、48h增殖抑制率分別為166％、266％、336％、338％、3