惡性腫瘤患者血清抗RecQ、BLM解旋酶自身抗體的檢測.pdf

1、目的：獲得高純度的重組 RecQ、BLM解旋酶，以重組解旋酶為包被抗原，采用間接ELISA法，檢測多種惡性腫瘤患者外周血血清抗RecQ、BLM解旋酶自身抗體的變化情況，討論其與惡性腫瘤發(fā)生的相關(guān)性。
　　方法：
　　1、構(gòu)建能表達(dá)可溶性 RecQ、BLM解旋酶的基因工程菌（已獲得），經(jīng)過大量培養(yǎng)，體外誘導(dǎo)該菌表達(dá)可溶性 RecQ、BLM解旋酶后，運用鎳離子親和層析法提取重組RecQ、BLM解旋酶。
　　2、應(yīng)用10％S

2、DS-PAGE分析重組RecQ、BLM解旋酶的分子量大小、純度；蛋白印跡技術(shù)（Western Blotting）檢測重組RecQ、BLM解旋酶可溶性、與抗體的結(jié)合能力；考馬斯亮藍(lán)G-250染色法測重組解旋酶的濃度；熒光偏振技術(shù)分析重組解旋酶的雙鏈DNA結(jié)合活性和解旋活性。
　　3、以重組解旋酶為抗原，采用間接ELISA法，對256例惡性腫瘤患者，33例良性疾病患者，125例健康體檢者外周血血清中抗RecQ、BLM解旋酶自身抗體進(jìn)行

3、檢測，對OD值進(jìn)行比較分析。
　　結(jié)果：獲得重組RecQ、BLM解旋酶溶液的濃度分別為1.204mg/ml、1.179mg/ml，其分子量大小分別為69kD、74kD，符合理論值，純度大于95%，可溶性高，能與小鼠抗His-tag單克隆抗體結(jié)合，具備雙鏈DNA的結(jié)合活性和解旋活性。應(yīng)用間接ELISA法測OD值比較發(fā)現(xiàn)：惡性腫瘤患者血清抗RecQ、BLM解旋酶自身抗體量明顯低于體檢組，其中白血病組、肝癌組、肺癌組、宮頸癌組、卵巢癌組