沉香化氣膠囊促腸動力機制研究.pdf

1、第一部分:沉香化氣膠囊對糖尿病大鼠小腸ICC、肌間神經(jīng)叢、CBS的作用
　　目的:探討沉香化氣膠囊對糖尿病(diabetesmellitus,DM)大鼠小腸Cajal間質(zhì)細胞(interstitialcellsofCajal,ICC)、肌間神經(jīng)叢、胱硫醚-β-合成酶(cystathionine-β-synthase,CBS)的影響。
　　方法:將健康雄性SD大鼠分為正常對照組、DM模型組、DM模型+中藥組。大鼠一次性腹腔注射

2、(ip)鏈脲佐菌素(STZ,60mg/kg)造模,選取成功模型,DM模型+中藥組每天給予中藥灌胃,模型組和正常對照組每天給予同等容量的蒸餾水,持續(xù)灌胃4周.。所有大鼠干預4周結束后。給予印度墨汁灌胃測定小腸傳輸速率,利用免疫組織化學和圖像分析觀察十二指腸c-Kit、蛋白基因產(chǎn)物9.5(proteingeneproduct9.5,PGP9.5)、神經(jīng)微絲蛋白(neurofilamentprotein,NFP)、CBS的表達。
　　結

3、果:灌胃4周,DM模型+中藥組小腸傳輸速率均比DM模型組明顯增加(71.26±5.22vs45.52±6.42,P<0.01),仍低于對照組(71.26±5.22vs80.40±7.33,P<0.05);DM模型+中藥組c-Kit、PGP9.5、NFP的陽性產(chǎn)物面積和吸光度值均比DM模型組明顯增加(443.28±24.40vs358.83±35.03,889.17±82.75vs445.17±64.06,276.20±63.41vs18

4、2.90±65.21,0.16±0.02vs0.13±0.02,0.24±0.02vs0.15±0.01,0.17±0.01vs0.13±0.01,均P<0.01),仍低于正常對照組(443.28±24.40vs557.28±42.35,P<0.01;889.17±82.75vs1050.50±90.22,P<0.01;276.20±63.41vs415.40±74.24,P<0.01;0.16±0.02vs0.18±0.02,P<0.

5、05;0.24±0.02vs0.27±0.02,P<0.01;0.17±0.01vs0.21±0.02,P<0.05)。然而DM模型+中藥組組CBS的陽性產(chǎn)物面積和平均吸光度值均比DM模型組低(417.03±53.76vs484.20±77.80,P<0.01;0.20±0.03vs0.27±0.03,P<0.01),卻高于正常組(417.03±53.76vs340.57±78.23,P<0.01;0.20±0.03vs0.14±0.0

6、3,P<0.05)。
　　結論:沉香化氣膠囊促進糖尿病大鼠小腸肌間神經(jīng)叢c-Kit、PGP9.5和NFP的表達,降低CBS的表達,提示對受損的DM大鼠小腸ICC、肌間神經(jīng)叢及氣體遞質(zhì)H2S的生成紊亂有部分恢復作用,從而對糖尿病大鼠的腸動力障礙有一定的改善效應。
　　第二部分:突觸在沉香化氣膠囊改善糖尿病大鼠腸動力中的作用
　　目的:探討沉香化氣膠囊對糖尿病(diabetesmellitus,DM)大鼠小腸突觸素(syn

7、aptophysin,Syn)表達的影響。
　　方法:將健康雄性SD大鼠分為正常對照組、DM模型組、DM模型+中藥組.大鼠一次性腹腔注射(ip)鏈脲佐菌素(STZ,60mg/kg)造模,選取成功模型,DM模型+中藥組每天給予中藥灌胃,模型組和正常對照組每天給予同等容量的蒸餾水,持續(xù)灌胃4周。所有大鼠干預4周結束后,給予印度墨汁灌胃測定小腸傳輸速率,利用免疫組織化學和圖像分析觀察十二指腸突觸素的表達,采用逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-P

8、CR)和Western-blot分別檢測了三組小腸肌間神經(jīng)叢中SynmRNA和蛋白的表達量,以恒定表達的β-actin作為內(nèi)參照。分別計算SynmRNA與β-actinmRNA、Syn蛋白與β-actin蛋白表達積分光密度值的比值(syn/β-actin),以反映組織中SynmRNA和蛋白的相對表達量。
　　結果:(1)灌胃4周后,DM模型+中藥組小腸傳輸速率均比DM模型組明顯增加(71.26±5.22vs45.52±6.42,P

9、<0.01),仍低于對照組(71.26±5.22vs80.40±7.33,P<0.05);(2)免疫組化結果顯示DM模型+中藥組突觸素的陽性產(chǎn)物面積和平均吸光度值均比DM模型組明顯增加(832.33±58.78vs488.83±58.56,0.25±0.02vs0.16±0.01,P<0.01),仍低于正常對照組(832.33±58.78vs937.67±101.23,P<0.05,0.25±0.02vs0.29±0.03,P<0.01

10、)。(3)RT-PCR研究結果顯示DM+中藥組SynmRNA表達顯著強于DM組,DM+中藥組syn/β-actin比值明顯較DM組增加(0.107±0.010vs0.085±0.011,P<0.05),但仍低于正常組(0.107±0.010vs0.255±0.011,P<0.05)。(4)westernblot研究結果顯示DM+中藥組的Syn蛋白表達也較模型對照組明顯增強,兩組間syn/β-actin比值比較有顯著性意義(0.418±0