電離輻射反應(yīng)中PML調(diào)控人肺腺癌A549細(xì)胞IL-6的表達(dá)及其介導(dǎo)的細(xì)胞旁效應(yīng).pdf

1、電離輻射反應(yīng)中,PML調(diào)控人肺腺癌A549細(xì)胞IL-6的表達(dá)及其介導(dǎo)的細(xì)胞旁效應(yīng)
　　目的:通過研究早幼粒細(xì)胞白血病蛋白PML在人肺腺癌A549細(xì)胞中對輻射誘導(dǎo)的促炎細(xì)胞因子的表達(dá)影響以及PML-IL-6信號途徑是否調(diào)控腫瘤細(xì)胞神經(jīng)內(nèi)分泌分化標(biāo)志性分子:神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)的表達(dá),初步探討PML在腫瘤輻射旁效應(yīng)中的功能。方法:利用IF、qRT-PCR、ELISA、Western-blot、CCK-8、抗體中和試驗等方法檢

2、測輻照后的A549細(xì)胞中的PML激活情況;PML是否參與多種促炎細(xì)胞因子(包括IL-6、IL-8)的表達(dá)調(diào)控;PML是否調(diào)控受照細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-6、IL-8的分泌量;以及PML是否調(diào)控受照細(xì)胞和旁細(xì)胞中神經(jīng)內(nèi)分泌分化標(biāo)志性酶NSE的表達(dá)和對腫瘤細(xì)胞的增殖。結(jié)果:A549細(xì)胞在10Gy輻照后,PML-NB的數(shù)量迅速增加,PMLmRNA和蛋白的表達(dá)在照后72小時明顯上調(diào)。10Gy劑量γ射線輻照后72小時,A549細(xì)胞中IL-1β、IL-

3、4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-12、IL-13、TGF-β和TNF-α等9種細(xì)胞因子mRNA表達(dá)上調(diào);敲低PML的A549細(xì)胞中,輻射誘導(dǎo)的IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α等4種炎性細(xì)胞因子mRNA表達(dá)上調(diào)被顯著抑制。輻照引發(fā)劑量和時間依賴的IL-6、IL-8mRNA的表達(dá)上調(diào),在10Gy輻照后72小時,IL-6、IL-8mRNA的表達(dá)達(dá)到最高峰,敲低PML后,IL-6、IL-8mRNA的表達(dá)上調(diào)受到明顯的抑制;EL

4、ISA檢測結(jié)果進一步證實,PML敲低組A549細(xì)胞中輻射誘導(dǎo)的IL-6、IL-8分泌上調(diào)明顯減弱,PML敲低組細(xì)胞的IR-CM所引發(fā)的旁細(xì)胞增殖抑制和IL-6介導(dǎo)的NSE表達(dá)抑制均明顯低于對照組。結(jié)論:在電離輻射反應(yīng)中,激活的PML參與調(diào)控多種輻射誘導(dǎo)的細(xì)胞因子的表達(dá),進而參與調(diào)控輻射誘導(dǎo)的細(xì)胞旁效應(yīng)。本研究揭示了PML參與輻射反應(yīng)中細(xì)胞間信號傳遞和腫瘤微環(huán)境調(diào)控的新信號途徑。
　　腫瘤細(xì)胞中Ro60的表達(dá)及其對腫瘤細(xì)胞輻射敏感性

5、的影響
　　目的:檢測腫瘤細(xì)胞中RNA結(jié)合蛋白Ro60的表達(dá)定位,研究Ro60在腫瘤增殖和輻射敏感性中的作用,初步分析Ro60在胃癌組織中的表達(dá)與p53的關(guān)系。方法:用Ro60真核表達(dá)載體轉(zhuǎn)染腫瘤細(xì)胞,觀察電離輻射引發(fā)的DNA損傷反應(yīng)中Ro60的表達(dá)定位規(guī)律;CCK-8和臺盼藍(lán)染色實驗檢測Ro60蛋白對腫瘤細(xì)胞增殖和輻射敏感性的影響;qRT-PCR檢測胃癌患者組織樣本中Ro60與p53mRNA的表達(dá)情況。結(jié)果:γ射線誘導(dǎo)的DNA損