膀胱腫瘤干細(xì)胞樣SP細(xì)胞的分選及鑒定.pdf

1、目的：探索膀胱癌干細(xì)胞樣SP細(xì)胞的分選方法，并分析其生物學(xué)特性。 方法：以流式細(xì)胞術(shù)對(duì)DNA染料hoechst33342染色后的人膀胱鱗癌細(xì)胞系SCaBER；人膀胱移行細(xì)胞癌細(xì)胞系T24、5637、Biu-87、EJ等5種膀胱癌細(xì)胞系進(jìn)行檢測(cè)，分選其中的SP細(xì)胞（side population，SP）及non-SP細(xì)胞。在電子熒光顯微鏡下進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察，并將培養(yǎng)后的SP細(xì)胞及non-SP細(xì)胞再次經(jīng)流式細(xì)胞儀分析驗(yàn)證；同時(shí)將SP細(xì)

2、胞、non-SP細(xì)胞以1×104及1×105細(xì)胞數(shù)分別接種至NOD/SCID小鼠皮下建立人膀胱癌NOD/SCID鼠移植瘤模型；MTT法分析絲裂霉素 C（0.05mg/ml、0.10 mg/ml、0.50 mg/ml）對(duì)SP細(xì)胞、non-SP細(xì)胞以及未分選SCaBER細(xì)胞的抑制作用。 結(jié)果：所檢測(cè)的SCaBER、T24、5637、Biu-87、EJ等5種膀胱癌細(xì)胞系中，僅在膀胱鱗癌細(xì)胞系SCaBER中發(fā)現(xiàn)SP細(xì)胞，分選出的SP細(xì)胞

3、占SCaBER總細(xì)胞數(shù)的0.6％。電子熒光顯微鏡下觀察，SP細(xì)胞體積較non-SP細(xì)胞小，SP細(xì)胞胞核藍(lán)色熒光暗淡或消失。FCM分析發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)后的SP細(xì)胞能分化為SP細(xì)胞及non-SP細(xì)胞；1×104細(xì)胞數(shù)條件下各種細(xì)胞均未成瘤，1×105細(xì)胞數(shù)注射NOD/SCID鼠SP細(xì)胞成瘤率為67％，non-SP細(xì)胞未生成腫瘤；SP細(xì)胞能外排熒光染料，0.05 mg/ml絲裂霉素 C對(duì)SP細(xì)胞的抑制率為（56.61±4.16）％，低于non-SP細(xì)