TLR4信號通路基因SNPs與膿毒癥易感性的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：
　　 膿毒癥是臨床危重患者的主要死亡原因之一，復(fù)雜發(fā)病機制及高死亡率使其成為世界性重癥醫(yī)學(xué)研究的難點和熱點。越來越多的研究發(fā)現(xiàn)膿毒癥的產(chǎn)生和轉(zhuǎn)歸具有明顯的遺傳背景，免疫反應(yīng)通路內(nèi)基因的突變，尤其是單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphism，SNPs)，可影響機體免疫系統(tǒng)對病原體的反應(yīng)程度。固有免疫受體Toll樣受體4(Toll-like receptor4，TLR4)及其信號通路在膿毒癥

2、的發(fā)生和發(fā)展過程中發(fā)揮著重要的作用，既往有研究顯示TLR4及其信號通路中重要分子基因SNPs與膿毒癥易感性相關(guān)，其中研究最多的是TLR4 Asp299Gly/Thr399Ile(rs4986790/rs4986791)和CD14C-159T(rs2569190)三個SNPs，但各項研究結(jié)果并不一致，多種因素導(dǎo)致這種差異性結(jié)果的產(chǎn)生，其中不同人種SNPs存在的差異以及多基因多位點的相互影響被認(rèn)為是主要的原因。本研究擬進一步探討這些SNPs

3、與膿毒癥易感性的相關(guān)性，同時繼續(xù)尋找該通路中可能會影響膿毒癥發(fā)生風(fēng)險的其他SNPs，并分析這些SNPs在膿毒癥發(fā)生過程中的相互作用。
　　 方法：
　　 在MEDLINE，EMBASE和Web of Science數(shù)據(jù)庫內(nèi)，對以往關(guān)于TLR4 Asp299Gly和Thr399Ile多態(tài)性與膿毒癥易感性相關(guān)性的文獻進行全面檢索，通過對多項研究結(jié)果進行Meta分析來探討TLR4 Asp299Gly和Thr399Ile多態(tài)性與

4、人類膿毒癥易感性的相關(guān)性，并計算比值比(odds ratios，ORs)和95％可信區(qū)間(confidence intervals，CIs)。課題第二部分繼續(xù)利用生物信息學(xué)方法篩選TLR4及其信號通路中與TLR4相互作用的分化抗原簇14(cluster of differentiation14，CD14)、髓樣分化蛋白2(myeloid differentiation2，MD2)和Toll/白介素-1受體相關(guān)蛋白(Toll/interl

5、eukin-1 receptor-associated protein/MyD88-adaptor-like，TIRAP/Mal)基因的SNPs進行研究，入選的SNPs包括以往有報道顯示與免疫炎癥性疾病相關(guān)的SNPs或基因的標(biāo)簽SNPs，運用基質(zhì)輔助激光解吸附電離飛行時間質(zhì)譜(matrix-assisted laser desorption/ionizationtime-of-flight mass spectrometry，MALDI

6、-TOF MS)技術(shù)檢測SNPs基因型，通過病例對照研究的方法探討這些SNPs與中國漢族人膿毒癥易感性的相關(guān)性，并運用多因素維度減少(Multifactor Dimensionality Reduction，MDR)軟件進行SNP-SNP相互作用的分析。最后，通過體外試驗觀察相關(guān)SNP不同基因型個體全血白細(xì)胞對脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)刺激的反應(yīng)性的差異，以驗證相關(guān)SNP的生物學(xué)功能。
　　 結(jié)果：<

7、br>　　 17項包含2212例膿毒癥患者和3880例對照者的研究入選關(guān)于TLR4Asp299Gly多態(tài)性與膿毒癥易感性相關(guān)性的Meta分析，其中10項包含711例膿毒癥患者和1376例對照者的研究入選關(guān)于TLR4Thr399Ile多態(tài)性與膿毒癥易感性相關(guān)性的Meta分析，研究對象主要為高加索人。TLR4Asp299Gly多態(tài)性與膿毒癥易感性相關(guān)性的總Meta分析OR值為1.22(95％CI：0.90-1.65，P=0.21)，TLR

8、4 Thr399Ile多態(tài)性與膿毒癥易感性相關(guān)性的總Meta分析OR值為1.16(95％CI：0.70-1.91，P=0.57)。對革蘭氏陰性菌和混合微生物感染所致膿毒癥進行的亞組Meta分析和敏感性檢驗也都顯示TLR4 Asp299Gly和Thr399Ile多態(tài)性與高加索人的膿毒癥易感性無顯著相關(guān)性。課題第二部分篩選出4個基因的7個SNPs進行檢測，包括TLR4rs10759932、TLR4rs11536889、MD2rs108087

9、98、CD14rs2569190和三個TIRAP/Mal基因標(biāo)簽SNPs(rs8177352、rs595209和lrs8177375)，病例對照研究共納入336例膿毒癥患者和359例對照患者，分為手術(shù)后組(99/105)和非手術(shù)后組(237/254)分別進行比較分析，兩組統(tǒng)計結(jié)果均顯示TIRAP/Mal rs595209多態(tài)性AC/CC基因型在膿毒癥患者中的分布顯著低于對照組患者(P<0.05)，校正性別、年齡、基礎(chǔ)疾病和手術(shù)方式等混雜

10、因素后，TIRAP/Malrs595209多態(tài)性仍與中國漢族人群膿毒癥易感性顯著相關(guān)，兩組0R值分別為0.287和0.508(95％CI，0.089-0.922，P=0.036；95％CI，0.282-0.918，P=0.025)。MDR分析結(jié)果顯示，在影響膿毒癥發(fā)生的過程中，不具有獨立作用的MD2rs10808798、TLR4rs10759932、TLR4rs11536889和CD14rs2569190多態(tài)性與膿毒癥相關(guān)SNPTIRA

11、P/Malrs595209具有協(xié)同作用，其中，MD2rs10808798和TLR4rs10759932這兩個SNPs之間的相互作用關(guān)系最強。LPS刺激下，TIPAP/Mal rs595209多態(tài)性AC/CC基因型外周血TNF-a和IL-10生成水平顯著低于AA基因型外周血，TIRAP/Malrs595209位點A>C的堿基變異能顯著減弱全血白細(xì)胞對LPS的反應(yīng)。
　　 結(jié)論：
　　 TLR4Asp299Gly和Thr39

12、9Ile多態(tài)性與高加索人革蘭氏陰性菌膿毒癥和全因膿毒癥的發(fā)生風(fēng)險無顯著相關(guān)性。TIRAP/Malrs595209多態(tài)性與中國漢族人膿毒癥的易感性顯著相關(guān)，攜帶rs595209多態(tài)性AC或CC基因型的個體較攜帶從基因型的個體發(fā)生膿毒癥的風(fēng)險低。在膿毒癥發(fā)生過程中相互作用的TIPAP/Mal、MD2、TLR4和CD14，其基因SNPs(TIRAP/Malrs595209、MD2rs10808798、TLR4rs10759932、TLR4rs