肝特異性L(fǎng)ASS2基因敲除小鼠肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的改變及對(duì)TNFAIP3-NF-kB通路的影響.pdf

1、LASS2（homosapiens longevity assurance homologue2）基因是人和小鼠的長(zhǎng)壽保障基因LASS家族成員。人和小鼠的LASS基因及產(chǎn)物有高度同源性。在LASS2基因功能的前期研究中，我們發(fā)現(xiàn)LASS2有抑制肝癌的作用。本研究主要內(nèi)容是比較幼年LASS2肝特異敲除小鼠和野生小鼠肝組織形態(tài)功能的差異及腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白3基因(tumor necrosis factor alpha-induced p

2、rotein3,TNFAIP3)/NF-kB(P50)在兩組小鼠中的差異表達(dá)，以闡明LASS2的生物學(xué)功能。
　　目的:
　　探討LASS2基因敲除后小鼠肝組織結(jié)構(gòu)及功能的改變及相關(guān)基因的改變，為詳細(xì)闡明LASS2基因在小鼠肝組織中的生物學(xué)功能奠定基礎(chǔ)。
　　方法:
　　將4周齡雄性C57BL6小鼠分為L(zhǎng)ASS2基因敲除組(LAS S2 KO)和野生型(WT)組，每組5只。小鼠脊椎脫臼法處死，稱(chēng)體重、肝重等。取小

3、鼠眼球血標(biāo)本檢測(cè)谷草轉(zhuǎn)氨酶(Aspartate transaminase，AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(Alanine aminotransferase，ALT)、乳酸脫氫酶(Lactate dehydrogenase，LDH)。小鼠肝組織，部分固定于A(yíng)AF(Alcohol，Acetic Acid，F(xiàn)ormalin)液，制作石蠟切片、HE染色和增殖細(xì)胞核抗原（Proliferating Cell Nuclear Antigen，PCNA）染色;

4、另一部分肝組織用于提取總蛋白和總RNA，進(jìn)行基因芯片分析，對(duì)白蛋白(Albumin，ALB)、甲胎蛋白(Alpha fetoprotein，AFP)、TNFAIP3、NF-kB(P50)的表達(dá)水平進(jìn)行qPCR及western blot檢測(cè)。
　　結(jié)果:
　　LASS2 KO小鼠肝/體重比升高。肝功能檢測(cè)結(jié)果顯示AST、ALT、LDH均不同程度上調(diào)。qPCR和western blot分析顯示ALB、AFP表達(dá)均顯著下調(diào)。HE染