脈沖射頻能量(PRFE)加快糖尿病小鼠傷口愈合的研究.pdf

1、目的:
　　傷口長期遷延不愈在難治性慢性傷口治療過程中普遍存在,因其極大的影響了患者的生活質(zhì)量且難以治愈,給患者和醫(yī)生都造成了很大的困擾。脈沖射頻能量(PRFE)已逐漸被接受用于此類慢性傷口的治療,并且在臨床上取得了令人滿意的療效,但對其作用機制仍然缺乏深入的研究。本研究擬建立一個糖尿病小鼠傷口模型作為此類難治性傷口的代表,用PRFE干預其愈合過程,通過肉眼、顯微鏡下及免疫組化等不同層面的觀察和分析,闡明PRFE的作用機制。

2、>　　方法:
　　取26只糖尿病小鼠,分為實驗組和對照組,每組13例。在26例小鼠背部同一位置做大小一致的全層皮膚切口。實驗組13例均使用脈沖射頻能量治療,一天兩次,每次30分鐘,對照組13例則使用不具有脈沖射頻能量的設備進行相同的處理。定期對傷口的愈合情況進行觀察,并采集圖片,通過圖像軟件計算傷口面積大小,觀察傷口的愈合速度、傷口邊緣的上皮化與傷口的收縮情況。在實驗第7、10、22及42天,處死部分小鼠,將其傷口及邊緣皮膚取下,

3、分別做H&E染色、馬松染色觀察傷口增殖情況;行Ki-67、CD31免疫組化染色,通過對染色增強細胞核計數(shù)和軟件分析測定細胞增殖情況;做Collagen-I、α-SMA、TGF-β、PDGF-A、VEGF、b-FGF、FGF-7等因子PCR定量,分析膠原蛋白及各生長因子在基因水平的變化;并在電鏡下觀察離體膠原纖維的形成過程,判斷離體條件下PRFE對膠原纖維的作用。
　　結(jié)果:
　　與對照組相比,實驗組小鼠傷口愈合的速度明顯加快

4、,特別是超過17天以后,其愈合速度顯著高于對照組(p<0.05)。同時,加快實驗組小鼠傷口愈合的主要因素為傷口收縮,而非上皮化。由切片觀察發(fā)現(xiàn),實驗組小鼠傷口肉芽組織增長較對照組厚且密,在第22天時實驗組小鼠傷口非上皮化處肉芽組織增厚明顯多于對照組(p<0.05)。馬松染色結(jié)果與H&E染色結(jié)果一致,實驗組染色普遍較對照組深,同時發(fā)現(xiàn)實驗組增厚的組織處有大量有序的膠原沉積。Ki-67核染色增強陽性結(jié)果顯示,實驗組小鼠傷口處皮膚細胞的增殖高

5、于對照組,在傷口中部,第10天和第22天實驗組細胞增殖分別高于對照組25％和45％,后者具有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。CD31血管染色在實驗組與對照組差別不具有統(tǒng)計學意義。通過對第22天組織的PCR定量分析,Collagen-I表達實驗組顯著高于對照組,且結(jié)果具有統(tǒng)計學意義(p<0.05),其余各生長因子實驗組與對照組相比均有不同程度的上調(diào),但其差異不具有統(tǒng)計學意義。離體培養(yǎng)的膠原纖維形成所需的時間,實驗組明顯短于對照組,且差異具有統(tǒng)