卡托普利對大鼠腎缺血-再灌注損傷的影響及其機(jī)制研究.pdf

1、腎臟為血液高灌注器官，對缺血及缺血-再灌注均敏感。腎缺血，再灌注損傷(I/R)可導(dǎo)致急性腎小管壞死甚至急性腎功能不全。目前，研究認(rèn)為，腎I/R的病理生理機(jī)制非常復(fù)雜，涉及多種因素參與，其中炎癥反應(yīng)發(fā)生是重要因素。而炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生和分布又與組織內(nèi)補(bǔ)體系統(tǒng)的活化有密切的聯(lián)系。在治療腎缺血.再灌注損傷過程，人們常常使用血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑如卡托普利。希望通過擴(kuò)張血管盡早恢復(fù)血流，減少缺血時(shí)間，防止腎缺血再灌注損傷的發(fā)生。 目的：本研

2、究從探討腎缺血再灌注損傷的機(jī)制出發(fā)，分析缺血再灌注損傷的關(guān)鍵因素以及血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑卡托普利通過何種機(jī)制而對腎缺血再灌注損傷起保護(hù)作用。 方法：本研究采用結(jié)扎一側(cè)大鼠腎血管制備缺血.再灌注損傷模型，通過生化分析檢測腎功能Scr、BUN值，應(yīng)用病理形態(tài)學(xué)和免疫組織化學(xué)觀察腎組織變化和相應(yīng)靶蛋白表達(dá)，同時(shí)采用ELISA檢測腎組織和血清中炎癥細(xì)胞因子IL-6、TNF-α等變化，再應(yīng)用RT-PCR檢測不同時(shí)間炎癥介質(zhì)IL-1β、T

3、NF-α的表達(dá)。通過磷酸化抗體、Western blot分析炎癥信號通路中MAPK信號通路的活化程度。比濁法分析血清中補(bǔ)體量的變化。 結(jié)果：①發(fā)現(xiàn)大鼠缺血-再灌注損傷1h后，Scr、BUN值開始升高；再灌注2h后，Scr、BUN值明顯上升。②缺血30min再灌注1h后，腎小球有炎性細(xì)胞浸潤；缺血30min再灌注2h后，腎小管損害加重，細(xì)胞壞死，腎間質(zhì)有大量炎性細(xì)胞浸潤。③腎缺血-再灌注損傷中，假手術(shù)組以及缺血-再灌注不同時(shí)間組，

4、血清中炎癥細(xì)胞因子IL-6、TNF-α等的水平無顯著變化。而腎組織中炎癥細(xì)胞因子IL-6、TNF-α等水平在腎缺血.再灌注1h、2h后明顯升高。缺血30min再灌注1h后，炎癥介質(zhì)基因IL-1β、TNF-α的mRNA水平明顯上調(diào)。④Westemblot結(jié)果顯示，當(dāng)腎臟缺血30min，腎組織還無灌注時(shí)，MAPK信號通路中p38、ERK、JNK通路出現(xiàn)激活。隨著再灌注時(shí)間的延長增加，P38、ERK和JNK明顯磷酸化(激活)。當(dāng)再灌注30mi

5、n時(shí)，MAPK的磷酸化程度較顯著，但隨著再灌注時(shí)間的延長，MAPK的磷酸化程度無明顯改變。⑤卡托普利(血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑)治療缺血-再灌注損傷后，其BUN、Scr值明顯降低，腎小球內(nèi)炎性細(xì)胞浸潤明顯減少，近端及皮髓交界處的腎小管上皮細(xì)胞腫脹減輕。同時(shí)腎組織中炎癥細(xì)胞因子IL-6等水平降低。但是應(yīng)用卡托普利治療后腎組織中JNK、ERK、P38磷酸化程度仍然較高，與缺血-再灌注損傷組比較無明顯差異。⑥腎組織再灌注時(shí)血清中補(bǔ)體總活性( C

6、H50)出現(xiàn)明顯降低，而卡托普利治療后血清中補(bǔ)體總活性明顯恢復(fù)。免疫細(xì)胞化學(xué)發(fā)現(xiàn)，缺血30min再灌注60min后，近端及皮髓交界處的腎小管上皮細(xì)胞基底部有補(bǔ)體活化片段C3d沉積，卡托普利治療后補(bǔ)體活化片段C3d數(shù)量和程度明顯減低。western blot分析補(bǔ)體C3活化時(shí)的活性片段C3d的表達(dá)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)經(jīng)缺血-再灌注損傷(I/R組)后腎組織中出現(xiàn)補(bǔ)體C3的活性片段C3d，而經(jīng)過卡托普利治療(CAP組)后腎組織中活性片段C3d表達(dá)量降低。