肺動脈高壓兒童BMPR2基因突變的研究.pdf

1、骨形成蛋白Ⅱ型受體(BMPR2)是家族性肺動脈高壓(FPAH)和特發(fā)性肺動脈高壓(IPAH)的重要致病因素。國外研究報道家族性、特發(fā)性肺動脈高壓及先天性心臟病肺動脈高壓患者(CHD/PAH)存在BMPR2基因突變。其中，家族性肺動脈高壓BMPR2基因突變類型有140余種。我國先天性心臟病合并肺動脈高壓患兒是否也存在BMPR2基因外顯子突變及國內(nèi)家族性肺動脈高壓患兒是否存在BMPR2基因新的突變位點(diǎn)，罕見報道，為此，本研究旨在探討先天性心

2、臟病合并肺動脈高壓患兒和家族性肺動脈高壓患兒是否存在BMPR2基因突變。
　　 第一部分:先天性心臟病合并肺動脈高壓患兒BMPR2基因新突變
　　 目的:探討先天性心臟病合并肺動脈高壓患兒是否存在BMPR2基因突變。
　　 研究對象和方法:
　　 1.研究對象:本研究收集自2011年2月至2011年8月在山東省立醫(yī)院小兒心臟科及心外科住院的66例先天性心臟病合并肺動脈高壓的患兒作為病例組，包括室間隔缺損2

3、5例、房間隔缺損5例、動脈導(dǎo)管未閉16例、復(fù)雜先天性心臟病20例。其中男39例，女27例，年齡在29天～18歲之間。66名種族、性別、年齡相匹配的健康兒童作為對照組。所有病例和對照均行超聲心動圖檢測，且病例組中有19例經(jīng)心導(dǎo)管檢測證實。
　　 2.方法:
　　 (1)采集66例無血緣關(guān)系的先天性心臟病合并肺動脈高壓的患兒和66名健康兒童外周靜脈血，提取基因組DNA，PCR方法擴(kuò)增BMPR2基因的1-13個外顯子編碼序列后

4、，對擴(kuò)增產(chǎn)物純化后進(jìn)行測序，測序峰圖用Sequencher4.7Demo軟件進(jìn)行分析，與GeneBank人BMPR2的基因序列進(jìn)行比對。
　　 (2)BMPR2基因多態(tài)性分析:通過x2檢驗比較BMPR2基因多態(tài)位點(diǎn)等位基因及其基因型在病例組與對照組間頻率分布有無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 (1)在66例先天性心臟病合并肺動脈高壓患兒中檢測出1例部分性房室隔缺損并二尖瓣前葉裂、肺動脈高壓患兒BMPR2基因外顯

5、子8發(fā)生錯義突變，而其余的病例和對照者均未發(fā)現(xiàn)相同的位點(diǎn)發(fā)生堿基突變。
　　 (2)BMPR2基因外顯子8發(fā)生錯義突變的患兒為女性，3歲4個月，活動后口唇紫紺1年半;心臟聽診為胸骨左緣2、3肋間可聞及3/6級噴射樣收縮期雜音，P2亢進(jìn)、固定分裂;胸片示心影增大呈梨形，主動脈結(jié)縮小，肺動脈段突出;超聲心動圖檢查顯示左房內(nèi)徑2.65cm，右房（橫徑）3.61cm，右室內(nèi)徑2.48cm，主肺動脈內(nèi)徑2.55cm，房室間隔缺損、二尖瓣前

6、葉裂并大量反流，肺動脈收縮壓力為38mmHg，診斷為部分性房室隔缺損并二尖瓣前葉裂、肺動脈高壓。
　　 (3)在66例先天性心臟病合并肺動脈高壓患兒中發(fā)現(xiàn)9名患兒和10名健康兒童BMPR2基因編碼區(qū)有一個單核苷酸多態(tài)位點(diǎn)，即c.2811G＞A，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，此多態(tài)位點(diǎn)在兩組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)論:
　　 1.1例部分性房室隔缺損并二尖瓣前葉裂、肺動脈高壓患兒BMPR2基因外顯子8發(fā)生錯義突變(p.Va

7、l348Ile，c.1042G＞A)，提示BMPR2基因突變可能和先天性心臟病與肺動脈高壓形成有關(guān)。本研究為國內(nèi)首次對先天性心臟病合并肺動脈高壓患兒進(jìn)行BMPR2基因突變篩查，且發(fā)現(xiàn)存在BMPR2基因突變，該突變位點(diǎn)為一新的突變位點(diǎn)。
　　 2.9名先天性心臟病合并肺動脈高壓患兒和10名健康兒童BMPR2基因編碼區(qū)均發(fā)現(xiàn)有一單核苷酸多態(tài)位點(diǎn)(c.2811G＞A)，此多態(tài)位點(diǎn)可能與先天性心臟病、肺動脈高壓形成無關(guān)。
　　

8、第二部分:家族性肺動脈高壓兒童BMPR2基因新突變
　　 目的:探討中國漢族家族性肺動脈高壓患兒是否存在BMPR2基因突變。
　　 研究對象和方法:
　　 1.研究對象:本研究收集2011年8月在山東省立醫(yī)院小兒心臟科住院的一個家族性肺動脈高壓家系，家系中成員共8人，男5例，女3例，其中患者1人。先證者經(jīng)實驗室檢查、心電圖、胸片及胸部CT以排除引起繼發(fā)性肺動脈高壓的疾病。先證者家系成員經(jīng)體檢、心電圖、胸片及超聲心

9、動圖檢查，均未見異常。87名健康兒童作為對照組。
　　 2.方法
　　 采集家系中8名成員和87名健康兒童外周靜脈血，提取基因組DNA，用PCR方法擴(kuò)增BMPR2基因13個外顯子編碼序列后，對擴(kuò)增產(chǎn)物純化后進(jìn)行測序，和GeneBank人的BMPR2基因序列進(jìn)行比對。
　　 結(jié)果:
　　 1.BMPR2基因C347R錯義突變可能是與家族性肺動脈高壓發(fā)生有關(guān)的一個新突變位點(diǎn)。
　　 2.先證者的外祖父

10、及其母親的BMPR2基因第8外顯子的第347位密碼子發(fā)生T→C的置換，使半胱氨酸變?yōu)榫彼?，即p.Cys347Arg，二者無肺動脈高壓的臨床表型。
　　 3.家系其他的成員和對照組BMPR2基因1-13號外顯子基因測序結(jié)果均未發(fā)現(xiàn)異常改變。
　　 4.先證者，男，3歲8月，活動后乏力2月;口唇紫紺，眼瞼浮腫，頸靜脈怒張，心尖搏動彌散，可觸及抬舉樣搏動。心音低鈍，可聞及奔馬律，P2亢進(jìn)。肝肋下4cm，劍下4cm，質(zhì)韌，雙下

11、肢輕度凹陷性水腫。胸片示肺動脈段突出，右房大。胸部CT示肺動脈主干及左右肺動脈增粗，橫徑約2cm，右心室增大，心包內(nèi)可見少量液體密度。超聲心動圖示右心房內(nèi)徑3.37cm，右心室內(nèi)經(jīng)2.88cm，右室后壁0.38cm，主肺動脈內(nèi)徑2.46cm，三尖瓣環(huán)擴(kuò)張，并探及中度反流信號，估測肺動脈收縮壓86mmHg，臨床診斷為原發(fā)性肺動脈高壓（重度），右心功能衰竭，心功能Ⅳ級。
　　 結(jié)論:BMPR2基因C347R錯義突變可能是與家族性肺動