鞣花酸對(duì)骨髓瘤SP2-0細(xì)胞的生物學(xué)作用.pdf

1、目的:本研究課題以小鼠骨髓瘤SP2/0細(xì)胞株作為研究對(duì)象，運(yùn)用了體外細(xì)胞培養(yǎng)和分子生物學(xué)技術(shù)等科研方法，探索鞣花酸對(duì)多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞增殖、凋亡和細(xì)胞周期的影響并檢測(cè)與癌細(xì)胞發(fā)生、發(fā)展密切關(guān)聯(lián)的腫瘤相關(guān)分子COX-2的表達(dá)情況。通過(guò)分析鞣花酸對(duì)小鼠骨髓瘤SP2/0細(xì)胞的生物學(xué)作用，為臨床手術(shù)治療MBD，有效清除病灶內(nèi)骨髓瘤細(xì)胞提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:體外培養(yǎng)小鼠骨髓瘤SP2/0細(xì)胞，設(shè)立3個(gè)階梯濃度藥物組和1個(gè)對(duì)照組，對(duì)照組不用鞣

2、花酸干預(yù)，實(shí)驗(yàn)組分別加入20，40和60μg/ml鞣花酸干預(yù)。1、用倒置顯微鏡觀察，不同濃度鞣花酸處理的實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組骨髓瘤SP2/0細(xì)胞48h后的細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化并拍照。2、用20，40和60μg/ml鞣花酸處理骨髓瘤SP2/0細(xì)胞48h后，采用Hoechst33258染色法染色，然后在倒置熒光顯微鏡下對(duì)比實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組細(xì)胞的凋亡情況并拍照。3、通過(guò)細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)（MTT法）檢測(cè)以上濃度鞣花酸處理48h后的SP2/0細(xì)胞的細(xì)胞增殖情況及細(xì)

3、胞活性。4、收集以上4組處理24h后的SP2/0細(xì)胞，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)鞣花酸對(duì)骨髓瘤SP2/0細(xì)胞早期凋亡的影響。5、用流式細(xì)胞儀測(cè)定，以上濃度藥物處理48h后的SP2/0細(xì)胞各個(gè)細(xì)胞周期中的細(xì)胞比率。6、通過(guò)Western blotting技術(shù)檢測(cè)腫瘤增值與凋亡相關(guān)蛋白COX-2在不同濃度藥物處理后的SP2/0細(xì)胞中表達(dá)量的變化。
　　結(jié)果:1、不同濃度藥物處理48h后的SP2/0細(xì)胞與對(duì)照組相比，隨鞣花酸濃度的增高，有活性的貼

4、壁細(xì)胞數(shù)量逐漸減少，同時(shí)培養(yǎng)液中漂浮的死亡細(xì)胞不斷增多。2、在倒置熒光顯微鏡下觀察Hoechst33258染色后的細(xì)胞，對(duì)照組細(xì)胞核呈現(xiàn)彌散、均勻的藍(lán)色熒光，實(shí)驗(yàn)組隨藥物濃度增加染色細(xì)胞數(shù)量逐漸減少并且在細(xì)胞中可見(jiàn)濃染的致密熒光。3、細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，20，40和60μg/ml鞣花酸孵育組細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率分別為(21.18±5.92)％，(44.58±3.43)％和(70.15±2.90)％，與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。

5、4、細(xì)胞早期凋亡率檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)組SP2/0細(xì)胞的早期凋亡率分別為(9.60±0.56)％，(19.30±1.51)％和(35.10±5.26)％，與對(duì)照組(3.23±0.85)％比較，p＜0.01，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。5、細(xì)胞周期分析顯示，鞣花酸孵育骨髓瘤SP2/0細(xì)胞株48h后，細(xì)胞周期阻滯于G1期，G1期細(xì)胞百分率分別為(55.21.±3.01)％，(64.48±0.43)％，(75.10±2.46)％，與對(duì)照組的(34.04±1.7