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文檔簡介
1、目的：構(gòu)建攜帶血管內(nèi)皮生長因子165(VEGF165)的重組腺病毒(Ad-VEGF165)，Ad-VEGFl65體外轉(zhuǎn)染大鼠骨髓源性血管內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPCs)，觀察轉(zhuǎn)染后細(xì)胞VEGF蛋白的表達(dá)情況以及重組腺病毒對(duì)EPCs生長的影響。 方法：利用pAdEasy系統(tǒng)構(gòu)建攜有血管內(nèi)皮生長因子165(VEGF165)的重組腺病毒載體。HEK293A細(xì)胞包裝、重組、擴(kuò)增腺病毒顆粒，熒光顯微鏡下觀察綠色熒光表達(dá)。對(duì)其進(jìn)行PCR、基因測序鑒定
2、。EGM-2MV培養(yǎng)基培養(yǎng)擴(kuò)增大鼠骨髓源性EPCs。Ad-VEGF165體外轉(zhuǎn)染EPCs，熒光顯微鏡下觀察綠色熒光表達(dá)，激光共聚焦測轉(zhuǎn)染效率，MTT法測MOI及對(duì)生長活性的影響，ELISA檢測上清中VEGF的表達(dá)。 結(jié)果：經(jīng)酶切鑒定、基因測序及綠色熒光觀察說明成功構(gòu)建了Ad-VEGF165。Ad-VEGF165成功轉(zhuǎn)染EPCs，轉(zhuǎn)染24h后在熒光顯微鏡下可見綠色熒光，增殖實(shí)驗(yàn)及細(xì)胞形態(tài)觀察證實(shí)1：50是合適的轉(zhuǎn)染比率。當(dāng)MOI為
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