重組雞白細(xì)胞介素-6蛋白免疫增強(qiáng)作用研究.pdf

1、雞的免疫抑制性疾病等對(duì)養(yǎng)雞業(yè)造成了巨大的損失，研究開發(fā)基因工程免疫增強(qiáng)劑可有效防治雞的免疫抑制性疾病。本研究在課題組前期已研究成功的基因工程重組雞白介素6（rChIL-6）蛋白的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步研究了 rChIL-6蛋白在SPF雞體內(nèi)對(duì)雞傳染性法氏囊病毒（IBDV）滅活疫苗和新城疫病毒(NDV)弱毒活疫苗的免疫增強(qiáng)作用，從體液和細(xì)胞免疫水平揭示其在體內(nèi)發(fā)揮免疫增強(qiáng)作用的機(jī)理，為開發(fā)以rChIL-6蛋白為基礎(chǔ)的基因工程免疫增強(qiáng)劑研究奠定基礎(chǔ)

2、。
　　采用間接 ELISA方法測(cè)定 rChIL-6蛋白與單抗發(fā)生免疫反應(yīng)活性；采用MTS法測(cè)定 rChIL-6蛋白體外促脾臟和外周血 T淋巴細(xì)胞(PBLC)增殖活性。將60只40日齡SPF雞隨機(jī)分為6組，進(jìn)行rChIL-6蛋白滴鼻點(diǎn)眼、肌肉注射方式對(duì) IBDV滅活疫苗免疫增強(qiáng)作用比較試驗(yàn)，于50日齡進(jìn)行免疫接種和 rChIL-6蛋白應(yīng)用，分別采用 ELISA實(shí)驗(yàn)檢測(cè)6組雞免疫前、后不同時(shí)間 IBDV抗體水平、不同細(xì)胞因子表達(dá)水平

3、，篩選出 rChIL-6蛋白在機(jī)體內(nèi)發(fā)揮最佳免疫增強(qiáng)作用的使用途徑。將80只7日齡SPF雞隨機(jī)平均分為8組，進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)了rChIL-6蛋白對(duì)IBDV滅活疫苗和NDV弱毒活疫苗免疫增強(qiáng)作用試驗(yàn)，于14日齡時(shí)進(jìn)行 rChIL-6蛋白與疫苗同時(shí)免疫注射，分別檢測(cè)免疫前、后不同時(shí)間血清中IBDV和 NDV抗體水平、不同細(xì)胞因子表達(dá)水平、脾淋巴細(xì)胞和 PBLC增殖活性、外周血T淋巴細(xì)胞亞群比值等指標(biāo)，以揭示rChIL-6蛋白在機(jī)體內(nèi)對(duì)疫苗的免疫增

4、強(qiáng)機(jī)理。
　　結(jié)果：rChIL-6蛋白可與單抗發(fā)生特異性免疫反應(yīng)，具有明顯的促雞脾臟淋巴細(xì)胞增殖活性；在1：29稀釋時(shí)具有輕微的促PBLC的增殖活性。DPI21后，采用肌肉注射、滴鼻點(diǎn)眼方式使用 rChIL-6蛋白實(shí)驗(yàn)組（第5、6組）的IBDV抗體水平顯著高于IBDV滅活疫苗對(duì)照組（p＜0.01），且第5組顯著高于第6組（p＜0.01）；DPI7～28，第5、6組ChIL-4、ChIL-2、ChIFN-α、ChIFN-γ的表達(dá)水平

5、顯著高于其它組（p＜0.01），且第5組表達(dá)水平顯著高于第6組（p＜0.01），DPI7～14，第5、6組ChIL-6的表達(dá)水平顯著高于其它組（p＜0.01），且第5組顯著高于第6組（p＜0.01）；以上表明采用肌肉注射途徑使用 rChIL-6蛋白對(duì) IBDV滅活疫苗的免疫增強(qiáng)作用優(yōu)于滴鼻點(diǎn)眼途徑。DPI7～49， rChIL-6蛋白與 IBDV滅活疫苗/NDV弱毒活疫苗共免疫組雞血清中IBDV抗體水平均極顯著高于疫苗對(duì)照組（p＜0.0

6、1）；DPI7～35，除 ChIFN-α外，第4組其它4種細(xì)胞因子的表達(dá)水平極顯著高于其他3組對(duì)照（p＜0.01），ChIFN-α的表達(dá)水平于DPI14～35期間顯著高于其他3組對(duì)照雞（p＜0.01）；rChIL-6蛋白單獨(dú)應(yīng)用后可顯著提高機(jī)體的 ChIL-4、ChIL-6和 ChIL-2的表達(dá)水平，但對(duì) ChIFN-γ、ChIFN-α的表達(dá)水平無明顯影響。DPI7～14，雞脾淋巴細(xì)胞增殖活性顯著高于其他3組對(duì)照雞（ p＜0.01）；D

7、PI7～21，雞PBLC的增殖活性稍高于其他3組對(duì)照（p＞0.05）；DPI7后第4組Th、Tc細(xì)胞百分含量均上升且大于空白對(duì)照，于DPI14達(dá)到峰值，此時(shí)CD4+/CD8+比值大于其它組，表明rChIL-6蛋白可增強(qiáng)機(jī)體細(xì)胞免疫能力。
　　結(jié)論：rChIL-6蛋白在體外可與抗ChIL-6單抗發(fā)生特異性免疫反應(yīng)，具有顯著的促雞脾淋巴細(xì)胞增殖的活性和微弱的促PBLC增殖活性；采用肌肉注射方式使用rChIL-6蛋白在雞體內(nèi)對(duì)IBDV滅