油茶蒲多糖的制備、組分分析及抗腫瘤活性初步研究.pdf

1、中國是世界上最大的茶油生產(chǎn)基地。油茶主要分布在我國的西南及湘、贛南部的山地丘陵，它是我國特有的油料樹種，另外，油茶在東南亞、日本等國也有極少量分布。油茶果是油茶樹的果子，它由油茶蒲和油茶籽構(gòu)成，質(zhì)量比分別為60％和40％左右。經(jīng)油茶籽提煉出來的山茶油，由于油酸和亞油酸含量合計在80％以上，具有很強(qiáng)的保健功能。油茶蒲可用來提栲膠、糠醛以及木糖醇等，還可用用制取活性炭和碳酸鉀等。我國雖然油茶資源豐富，但對油茶蒲的開發(fā)利用卻非常薄弱。目前，國

2、內(nèi)外學(xué)者對植物活性多糖的研究報道很多，卻未涉及有關(guān)油茶蒲多糖。本文重點對油茶蒲多糖的提取、純化及其抗腫瘤活性進(jìn)行研究，主要研究內(nèi)容和結(jié)果如下。
　　 (1)多糖的提取工藝優(yōu)化研究
　　 以油茶蒲為原料、多糖得率為響應(yīng)值，在單因素試驗的基礎(chǔ)上，通過正交試驗優(yōu)化工藝參數(shù)。研究了提取時間、提取溫度、料液比和醇沉乙醇濃度四個因素對多糖得率的影響。實驗結(jié)果表明，提取溫度的影響達(dá)顯著水平，提取時間、料液比和乙醇濃度則無顯著影響。經(jīng)優(yōu)

3、化后的油茶蒲多糖提取工藝參數(shù)為：溫度90℃、時間1.0 h、料液比1：15、醇沉乙醇終濃度80％。在此條件下油茶蒲粗多糖得率為5.93％。
　　 (2)多糖的分離、純化研究
　　 采用Sevag法經(jīng)7次去蛋白操作后，CPPS中多糖含量損失率達(dá)到49.8％，但蛋白質(zhì)的去除率僅為16.8％，去蛋白效果不明顯。采用靜態(tài)吸附實驗?zāi)Ｐ停远嗵菗p失率、蛋白去除率及多酚去除率為考察指標(biāo)，確定了DA—201為最佳的除雜大孔樹脂類型。靜態(tài)

4、吸附實驗結(jié)果表明：DA—201對CPPS溶液中蛋白質(zhì)的去除率達(dá)到55.0％，對多酚的去除率高達(dá)76.2％。DA—201大孔樹脂能有效去除CPPS中的蛋白質(zhì)及多酚，且去蛋白效果優(yōu)于Sevag法。CPPS經(jīng)大孔樹脂除雜后，得到兩個主要多糖組分：CPPS1和CPPS2。其中，CPPS1得率為48.2％，與CPPS相比，多糖含量提高了29.4％，蛋白質(zhì)含量下降了36.6％，總酚含量下降了52.3％。進(jìn)一步采用DEAE—52纖維素柱層析純化CPP

5、S1和CPPS2，分別得到主要多糖組分CPPS1—1、CPPS1—2和CPPS2—1、CPPS2—2。
　　 (3)多糖的組分分析研究
　　 采用高效液相色譜法測定油茶蒲多糖的分子量分布，氣相色譜法分析糖基組成。結(jié)果表明，油茶蒲多糖分子量分布范圍為在2.9×103～2.8×105之間，經(jīng)純化后，CPPS中小分子量和大分子量多糖片段得到了一定分離。糖基分析結(jié)果顯示，CPPS至少由鼠李糖(Rha)、巖藻糖(Fuc)、阿拉伯糖

6、(Ara)、甘露糖(Man)、葡萄糖(Glu)以及半乳糖(Gal)等6種單糖組成，其質(zhì)量分?jǐn)?shù)依次為：6.65％、19.07％、2.67％、7.05％、48.76％以及15.78％。CPPS1—1的單糖組成和CPPS的單糖組成種類相同，但組成比例不同，CPPS1—1的單糖組成質(zhì)量分?jǐn)?shù)依次為：4.66％、8.84％、4.37％、8.86％、57.19％、16.06％。葡糖糖是油茶蒲多糖的主要結(jié)構(gòu)單元。
　　 (4)多糖的抗氧化活性研

7、究
　　 應(yīng)用DPPH法、TEAC法、FRAP法和Fenton反應(yīng)分別評價油茶蒲不同提取物的抗氧化活性。結(jié)果顯示，CPPS物表現(xiàn)出一定的抗氧化活性，并具有濃度依賴關(guān)系。不同提取物的抗氧化能力強(qiáng)弱依次為：抗壞血酸＞水提物＞醇沉上清＞CPPS。
　　 (5)多糖的抗腫瘤活性初步研究
　　 依次采用體外四甲基偶氮唑鹽比色法(MTT)和小鼠體內(nèi)S180肉瘤模型，考察CPPS的抑瘤活性。結(jié)果表明，其對宮頸癌細(xì)胞Hela、肺

8、癌細(xì)胞H460、肝癌細(xì)胞HepG2的增殖均有較明顯的抑制作用，且呈良好的濃度依賴關(guān)系。當(dāng)試樣濃度在500μg/mL時，對HepG2的生長抑制率達(dá)到74.54％，對H460的生長抑制率達(dá)到51.38％，對Hela的生長抑制率達(dá)到63.42％。同時，CPPS對小鼠S180肉瘤的生長也具有顯著的抑制作用，當(dāng)灌胃劑量為450mg/kg時，對S180小鼠的腫瘤生長抑制率達(dá)到38.38％。
　　 研究結(jié)果表明，油茶浦多糖是一種極具研究價值和