妊娠期高血壓疾病患者腸系膜動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞BKCa的改變.pdf

1、目的:妊娠期高血壓疾(hypertensive disorders complicating pregnancy，HDCP)是產(chǎn)科嚴(yán)重并發(fā)癥，也是導(dǎo)致孕產(chǎn)婦及圍產(chǎn)兒病死率升高的主要原因。該疾病組分類復(fù)雜，病因病機(jī)也未闡明清楚。許多學(xué)者認(rèn)為該疾病是母體，胎兒，胎盤等眾多因素作用下，發(fā)生的全身小血管痙攣，內(nèi)皮損傷及局部缺血[1]。血壓升高是該疾病最突出的臨床癥狀，也是衡量該疾病嚴(yán)重程度的標(biāo)準(zhǔn)之一。研究發(fā)現(xiàn)，血管平滑肌細(xì)胞上的離子通道參與了血

2、管張力調(diào)節(jié)，其中大電導(dǎo)鈣激活鉀通道(large conductance calcium-activatedpotassium channels，BKCa)扮演著重要角色[2]。當(dāng)BKCa被持續(xù)激活，細(xì)胞膜發(fā)生超級化，電壓依賴性鈣通道的活性受到抑制，減少了Ca2+的內(nèi)流，血管舒張，血壓下降[3]。BKCa對血管平滑肌靜息膜電位的維持上起著主要作用。腸系膜動(dòng)脈為微小動(dòng)脈，是形成血管外周阻力的主要組成部分，對血壓的變化具有重要影響。本實(shí)驗(yàn)采用

3、單通道膜片鉗技術(shù)，觀察妊娠期高血壓疾病患者腸系膜動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞BKCa的單通道電流，了解該疾病中腸系膜動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞BKCa功能活動(dòng)是否改變，認(rèn)識妊娠期高血壓疾病與腸系膜動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞BKCa活性的相關(guān)性，為進(jìn)一步研究該病的病因病機(jī)提供理論依據(jù)。方法:1.選擇內(nèi)徑為1～2mm的腸系膜動(dòng)脈，剝除血管周圍脂肪結(jié)締組織，縱向剖開，剪成2 mm×2 mm的組織塊，兩步急性酶分離法分離出單個(gè)平滑肌細(xì)胞。選擇胞膜完整，立體感強(qiáng)，貼壁良好的細(xì)胞進(jìn)

4、行實(shí)驗(yàn)。采用單通道膜片鉗技術(shù)記錄平滑肌細(xì)胞BKCa單通道電流。電流信號經(jīng)膜片放大器放大處理，1KHz低通濾波，在軟件pClamp10.1支持下，通過12位A/D、D/A轉(zhuǎn)換器記錄并儲存到計(jì)算機(jī)，Clampfit軟件系統(tǒng)對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。采樣頻率為10KHz，采樣方式為Gap Free。觀察并比較妊娠期高血壓疾病(hypertensive disorders complicating pregnancy，HDCP)組、正常晚期妊娠(norm

5、al late pregnancy，NLP)組、非妊娠(no pregnancy，NP)組的BKCa單通道電流差異。結(jié)果:1.采用兩步急性酶分離法分離人腸系膜動(dòng)脈，能獲得數(shù)量較多、質(zhì)量較高的平滑肌細(xì)胞，滿足實(shí)驗(yàn)要求。2.本實(shí)驗(yàn)記錄到的人腸系膜平滑肌細(xì)胞BKCa單通道電流信號特性:大電導(dǎo)性，電壓依賴性，鈣離子濃度依賴性，能被BKCa通道特異性阻斷劑IbTX阻斷。3.三個(gè)組腸系膜動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞BKCa單通道電流功能活動(dòng)的比較:(1)妊娠期高

6、血壓組（HDCP組）BKCa單通道電流的電導(dǎo)值明顯低于其他兩組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。(2)在細(xì)胞貼附式膜片下，三個(gè)組腸系膜動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞BKCa單通道電流的功能活動(dòng)不同，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。HDCP組BKCa單通道電流的電流幅值(Amp)比NLP組和NP組明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。NLP組與NP組比較，差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。NLP組BKCa單通道電流的開放概率(Po)最大，

7、HDCP組BKCa單通道電流的開放概率(Po)則最小，即PoNLP組＞PoNP組＞PoHDCP組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。NLP組BKCa單通道電流的平均開放時(shí)間(To)最長，HDCP組BKCa單通道電流的平均開放時(shí)間(To)最短，即ToNLP組＞ToNP紐＞ToHDCP組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。HDCP組BKCa單通道電流的平均關(guān)閉時(shí)間(Tc)比NLP組和NP組明顯延長，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。N

8、LP組與NP組比較，差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);(3)用內(nèi)面向外式膜片方式下，膜電位為+40 mV，隨浴液中游離Ca2+濃度增加(10-8M、10-7M、5×10-7M、10-6M、10-5M)，三個(gè)組腸系膜動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞BKCa單通道電流的功能活動(dòng)變化不同，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。HDCP組BKCa單通道電流的電流幅值(Amp)、開放概率(Po)、平均開放時(shí)間(To)與NLP組相比較，明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

9、＜0.05），平均關(guān)閉時(shí)間(Tc)比NLP組明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);HDCP組BKCa單通道電流的電流幅值(Amp)、開放概率(Po)、平均開放時(shí)間(To)與NP組相比較，明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，平均關(guān)閉時(shí)間(Tc)比NP組明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);這種差異在NLP組和NP組之間不明顯，不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。結(jié)論:1.本實(shí)驗(yàn)采用兩步急性酶分離法，獲得數(shù)量較多、質(zhì)量較高