重組人Ⅱ型腫瘤壞死因子受體-抗體融合蛋白抑制強(qiáng)直性脊柱炎趨化因子CXCL16及其受體CXCR6的表達(dá).pdf

1、目的：強(qiáng)直性脊柱炎(AS)是一種慢性炎癥性自身免疫性疾病，其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，至今仍未明確。近來研究發(fā)現(xiàn)在趨化因子和炎癥因子共同構(gòu)成的因子網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)中，分子間通過相互作用及相互影響，在AS的發(fā)病機(jī)制中起著關(guān)鍵作用。CXCL16為趨化因子CXC亞族的一種多功能趨化因子，在炎癥-免疫反應(yīng)中發(fā)揮重要作用，且已有研究發(fā)現(xiàn)CXCL16在AS外周血中明顯升高，但其在AS發(fā)病機(jī)制中的作用并不清楚。故本研究將通過檢測AS患者外周血細(xì)胞核因子-κB受體活化因子

2、配體(RANKL)、骨保護(hù)素(OPG)、CXCL16及CXCR6的表達(dá)水平，CXCL16對淋巴細(xì)胞增殖活化的影響以及比較重組人Ⅱ型腫瘤壞死因子受體-抗體融合蛋白(rhTNFR∶Fc)治療前后外周血中CXCL16、CXCR6表達(dá)水平的變化，初步探討CXCL16/CXCR6在AS發(fā)病中的作用機(jī)制及rhTNFR∶Fc與之相關(guān)的作用機(jī)理。
　　方法：收集22例AS活動期患者，給予rhTNFR∶Fc25mg，皮下注射，每周2次，連續(xù)治療3個

3、月;另選取22名年齡、性別與AS患者相匹配的健康體檢者作對照。用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)分別檢測血清RANKL、OPG及CXCL16表達(dá)水平，熒光定量PCR法分別檢測外周血單個核細(xì)胞CXCL16、CXCR6 mRNA表達(dá)水平，CCK-8法和ELISA法分別探查不同濃度的CXCL16重組蛋白(40ng/ml、80ng/ml)刺激淋巴細(xì)胞的增殖情況及培養(yǎng)上清中RANKL的表達(dá)水平。用t檢驗、單因素方差分析及Pearson法進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分

4、析。
　　結(jié)果：①單用rhTNFR∶Fc治療3個月后，AS患者臨床效果達(dá)ASAS20的有21例，占95.45％，達(dá)ASAS40的有18例，占81.82％，達(dá)ASAS70的有12例，占54.55％，各療效指標(biāo)血沉(ESR)、C反應(yīng)蛋白(CRP)、Bath AS活動指數(shù)(BASDAI)、Bath AS功能指數(shù)(BASFI)、脊柱痛、夜間痛均較治療前顯著下降（t=8.38，t=8.45，t=13.23，t=10.72，t=24.91，t

5、=39.14，P均＜0.05）。②AS活動組患者血清RANK水平、RANKL/OPG比值均高于健康對照組[(6.01±1.00)pmol/lvs(3.41±0.61)pmol/l，t=10.41;(0.98±0.16)vs(0.62±0.16)，t=7.45，P均＜0.05]。③AS活動組患者血清CXCL16的表達(dá)均高于健康對照組及AS治療組[(2.28±0.15)ng/mlvs(1.83±0.11)ng/mlvs(1.82±0.12)

6、ng/ml，t=11.37，t=11.35，P均＜0.05]，外周血單個核細(xì)胞CXCL16、CXCR6 mRNA的表達(dá)也均高于健康對照組及AS治療組[(0.058±0.030)vs(0.033±0.008)vs(0.034±0.014),t=3.74,t=3.37,(0.046±0.024)vs(0.020±0.007)vs(0.025±0.009),t=4.96,t=4.06,P均＜0.05]。④在CXCL16(40ng/ml和80n

7、g/ml)刺激下，AS活動期淋巴細(xì)胞增殖能力明顯高于無CXCL16組[(136±31)％vs(183±35)％vs(100％)，t=5.52，t=11.25，P均＜0.05]，健康對照組經(jīng)CXCL16刺激后淋巴細(xì)胞增殖能力雖有所提高，但刺激前后差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P均＞0.05）。AS活動期RANKL表達(dá)水平明顯高于無空白對照組[（1.439±0.091）pmol/lvs(1.85±0.111)pmol/lvs(1.097±0.088)p

8、mol/l,t=11.49,t=25.55，P均＜0.05]。⑤AS活動組血清CXCL16表達(dá)水平與RANKL、RANKL/OPG比值及ESR、CRP等臨床指標(biāo)成正相關(guān)(r=0.87，r=0.8，r=0.45，r=0.639，P均＜0.05)，與OPG無顯著相關(guān)性(r=0.075，P＞0.05)。
　　結(jié)論：CXCL16/CXCR6在AS的發(fā)病中可能發(fā)揮著重要作用，作為目前最有效的靶向治療手段之一，rhTNFR∶Fc降低CXCL1