利用激光顯微切割聯(lián)合質(zhì)譜蛋白質(zhì)組學(xué)鑒定系統(tǒng)性淀粉樣變類型.pdf

1、學(xué)校代碼：10023學(xué)號：200601100利用激光顯微切割聯(lián)合質(zhì)譜蛋白質(zhì)組學(xué)鑒定系統(tǒng)性淀粉樣變類型專業(yè)年級：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)專業(yè)06級姓名：沈愷妮導(dǎo)師：周道斌(教授)李劍(副教授)北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院臨床學(xué)院(北京協(xié)和醫(yī)院)血液內(nèi)科完成日期：2014年6月摘要背景及目的：福爾馬林固定石蠟包埋(FFPE)標(biāo)本結(jié)合蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)可以利用院內(nèi)豐富的病理組織資源進(jìn)行研究，但目前尚無標(biāo)準(zhǔn)的蛋白提取策略。我們應(yīng)用當(dāng)前五種常用的蛋白提取液，對大鼠不

2、同臟器的FFPE微切標(biāo)本進(jìn)行蛋白組成分析，從而確定出最佳的能用于后續(xù)淀粉樣變質(zhì)譜分型的蛋白提取液。淀粉樣變是由致淀粉樣變蛋白在細(xì)胞外異常沉積所導(dǎo)致的一組疾病，不同亞型的發(fā)病機(jī)制、疾病進(jìn)程、治療手段及預(yù)后均有顯著差異，因而準(zhǔn)確的系統(tǒng)性淀粉樣變分型是疾病治療的先決條件。由于抗體類型有限、標(biāo)本處理后抗原表位丟失和雜質(zhì)蛋白干擾等因素，傳統(tǒng)的免疫組化法(IHC)診斷淀粉樣變亞型并不理想。以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的蛋白質(zhì)組學(xué)手段，通過鑒定病灶部位的全部蛋白類型

3、，并根據(jù)豐度高低判斷致淀粉樣變蛋白種類，從而實(shí)現(xiàn)亞型鑒定已經(jīng)成為新的診斷方法。在本研究中，我們試圖探討利用激光顯微切割聯(lián)合質(zhì)譜蛋白質(zhì)組學(xué)(LMD／MS)方法對系統(tǒng)性淀粉樣變進(jìn)行分型的可行性，比較質(zhì)譜診斷與免疫固定電泳(IFE)、血清游離輕鏈(FLC)診斷的準(zhǔn)確性差異，以及質(zhì)譜在不同組織類型中分型的成功率。方法：應(yīng)用含有Zwittergem316、SDS、PEG20000、尿素的四種蛋白裂解液及FFPEFASP蛋白提取試劑盒對大鼠腦、心臟

4、、腎臟、肝臟及肺組織FFPE顯微切割標(biāo)本進(jìn)行蛋白提取，根據(jù)鑒定多肽數(shù)、蛋白數(shù)、譜圖數(shù)、蛋白豐度確定出最優(yōu)裂解液并用于淀粉樣變質(zhì)譜分型。收集北京協(xié)和醫(yī)院2000年1月至2014年5月期間病理確診為系統(tǒng)性淀粉樣變的133例患者的FFPE病理標(biāo)本。切片行剛果紅染色后，利用LMD收集染色陽性區(qū)域組織。選取最佳裂解液進(jìn)行蛋白提取后行質(zhì)譜分析，根據(jù)豐度最高的致淀粉樣變蛋白確定淀粉樣變亞型。結(jié)果：在微切標(biāo)本中，含有ZwiRergent316的裂解液在