實(shí)驗(yàn)性近視及其恢復(fù)期豚鼠視網(wǎng)膜黑視素表達(dá)的改變.pdf

1、在視覺形成過程中，感光細(xì)胞是通過感光色素接受光信息的。而屈光狀態(tài)的發(fā)育依賴視覺，只有干擾正常的視覺環(huán)境才能引起近視。因此作為非成像視覺系統(tǒng)的感光色素，黑視素(MLO)可能在近視眼形成的過程中起到視覺信息傳遞和調(diào)控的作用。目前關(guān)于MLO在形覺剝奪性近視(FDM)和離焦性近視(LIM)及其恢復(fù)期的表達(dá)及作用如何尚未見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)的目的是探討MLO在FDM和LIM及其恢復(fù)期在視網(wǎng)膜中的表達(dá)是否有改變。通過建立豚鼠形覺剝奪近視和離焦性近視及其恢

2、復(fù)期模型，采用免疫熒光與western-blotting方法檢測MLO蛋白在兩種近視眼模型及其恢復(fù)期中的表達(dá)。因此本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)了以下內(nèi)容:一.形覺剝奪性近視及其恢復(fù)期豚鼠視網(wǎng)膜黑視素表達(dá)的變化;二.離焦性近視及其恢復(fù)期豚鼠視網(wǎng)膜黑視素表達(dá)的變化。初步探討視網(wǎng)膜黑視素的表達(dá)與實(shí)驗(yàn)性近視的關(guān)系。
　　 第一部分形覺剝奪性近視及其恢復(fù)期豚鼠視網(wǎng)膜黑視素表達(dá)的變化
　　 目的:觀察在三色豚鼠形覺剝奪性近視及其恢復(fù)期視網(wǎng)膜黑視素表達(dá)

3、的改變，初步探討豚鼠視網(wǎng)膜黑視素的表達(dá)與形覺剝奪性近視的關(guān)系。
　　 方法:實(shí)驗(yàn)研究。
　　 第一步形覺剝奪性近視及其恢復(fù)模型的建立：以豚鼠為實(shí)驗(yàn)動物，進(jìn)行單眼形覺剝奪建立形覺剝奪性近視動物模型以及單眼形覺剝奪后去除頭套進(jìn)行形覺剝奪恢復(fù)。實(shí)驗(yàn)前后分別采用紅外偏心攝影驗(yàn)光儀測定屈光力，A超測定前房深度、晶狀體厚度、玻璃體腔深度、眼軸長度，對數(shù)據(jù)進(jìn)行綜合分析，確定近視及其恢復(fù)模型的建立。
　　 第二步黑視素蛋白含量的

4、測定形覺剝奪性近視及其恢復(fù)模型：建立后頸椎脫臼處死豚鼠，取眼球進(jìn)行免疫熒光實(shí)驗(yàn)，取視網(wǎng)膜進(jìn)行Western-blotting實(shí)驗(yàn)。觀察形覺剝奪性近視及形覺剝奪性近視恢復(fù)期豚鼠視網(wǎng)膜中黑視素表達(dá)的情況。
　　 將30只3周齡三色豚鼠隨機(jī)均分為形覺剝奪2周組（單眼遮蓋）、形覺剝奪2周后恢復(fù)3天組、正常對照組。在形覺剝奪前、后及恢復(fù)期分別測量屈光度、玻璃體腔深度、眼軸長度，并比較實(shí)驗(yàn)眼、對側(cè)眼、正常對照眼之間的差異。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后于上午1

5、0-12點(diǎn)鐘取材，用免疫組織化學(xué)及蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測視網(wǎng)膜黑視素蛋白的表達(dá)。
　　 結(jié)果:形覺剝奪形成的近視度數(shù)為（-6.40±1.08）D，與對側(cè)眼和正常對照眼相比，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，玻璃體腔深度、眼軸長度分別延長（0.18±0.05）mm、（0.23±0.11）mm，與對側(cè)眼和正常對照眼相比組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。形覺剝奪恢復(fù)3天后實(shí)驗(yàn)眼屈光度數(shù)恢復(fù)70％左右，與自身對照組、正常對照組相比，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，玻璃體

6、腔深度、眼軸長度組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示豚鼠形覺剝奪近視發(fā)生后，實(shí)驗(yàn)眼視網(wǎng)膜黑視素表達(dá)均明顯低于對側(cè)眼，恢復(fù)期實(shí)驗(yàn)眼與對側(cè)眼相比無明顯差異。Western blot結(jié)果和免疫組織化學(xué)結(jié)果一致。
　　 結(jié)論:形覺剝奪性近視的發(fā)生伴隨有視網(wǎng)膜黑視素表達(dá)的降低;形覺剝奪性近視恢復(fù)期視網(wǎng)膜黑視素表達(dá)上升;包含黑視素視蛋白的感光節(jié)細(xì)胞可能能夠感受形覺剝奪的信息;視網(wǎng)膜黑視素表達(dá)的降低可能參與了形覺剝奪性近視眼的形成。

7、
　　 第二部分鏡片誘導(dǎo)性近視及其恢復(fù)期豚鼠視網(wǎng)膜黑視素表達(dá)的變化
　　 目的:觀察在三色豚鼠鏡片誘導(dǎo)性近視及其恢復(fù)期視網(wǎng)膜黑視素表達(dá)的改變，初步探討豚鼠視網(wǎng)膜黑視素的表達(dá)與鏡片誘導(dǎo)性近視的關(guān)系。
　　 方法:實(shí)驗(yàn)研究。
　　 第一步鏡片誘導(dǎo)性近視模型的建立：以豚鼠為實(shí)驗(yàn)動物，進(jìn)行單眼鏡片誘導(dǎo)，建立鏡片誘導(dǎo)性近視動物模型，建立好豚鼠鏡片誘導(dǎo)性近視模型后，去掉實(shí)驗(yàn)處理2天建立鏡片誘導(dǎo)性近視恢復(fù)模型。實(shí)驗(yàn)前后

8、分別采用紅外偏心攝影驗(yàn)光儀測定屈光力，A超測定前房深度、晶狀體厚度、玻璃體腔深度、眼軸長度，對數(shù)據(jù)進(jìn)行綜合分析，確定鏡片誘導(dǎo)性近視及其恢復(fù)模型的建立。
　　 第二步黑視素蛋白含量的測定鏡片誘導(dǎo)性近視及其恢復(fù)模型建立：后頸椎脫臼處死豚鼠后，取眼球進(jìn)行免疫熒光實(shí)驗(yàn)，取視網(wǎng)膜進(jìn)行Western-blotting實(shí)驗(yàn)。觀察鏡片誘導(dǎo)性近視及其恢復(fù)期豚鼠視網(wǎng)膜中黑視素表達(dá)的情況。
　　 將30只3周齡三色豚鼠隨機(jī)均分為負(fù)透鏡誘導(dǎo)3天

9、組（單眼-4.00D透鏡誘導(dǎo)）、負(fù)透鏡誘導(dǎo)3天后恢復(fù)2天組、正常對照組。在透鏡誘導(dǎo)前、后及恢復(fù)期分別測量屈光度、玻璃體腔深度、眼軸長度，并比較實(shí)驗(yàn)眼、對側(cè)眼、正常對照眼之間的差異。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后于上午10-12點(diǎn)鐘取材，用免疫組織化學(xué)及蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測視網(wǎng)膜黑視素蛋白的表達(dá)。
　　 結(jié)果:透鏡誘導(dǎo)后形成的近視度數(shù)為（-2.52±0.71）D，與對側(cè)眼和正常對照眼相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，玻璃體腔深度、眼軸長度分別延長(0.04±0.

10、05) mm、(0.08±0.07) mm，與對側(cè)眼和正常對照眼相比組間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。鏡片誘導(dǎo)恢復(fù)2天后實(shí)驗(yàn)眼屈光度數(shù)、玻璃體腔深度、眼軸長度與自身對照組、正常對照組相比差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示豚鼠透鏡誘導(dǎo)性近視發(fā)生后，實(shí)驗(yàn)眼視網(wǎng)膜黑視素表達(dá)均明顯低于對側(cè)眼，恢復(fù)期實(shí)驗(yàn)眼與對側(cè)眼相比無明顯差異。Western blot結(jié)果和免疫組織化學(xué)結(jié)果一致。
　　 結(jié)論:鏡片誘導(dǎo)性近視的發(fā)生伴隨有視網(wǎng)膜黑視素表達(dá)的降低