DAT對豚鼠形覺剝奪性近視眼視網(wǎng)膜色素上皮bFGF表達作用的研究.pdf

1、第一章、多巴胺轉(zhuǎn)運蛋白及堿性成纖維細胞生長因子在豚鼠形覺剝奪性近視眼視網(wǎng)膜色素上皮的表達
　　 目的:建立豚鼠形覺剝奪性近視眼動物模型,觀察多巴胺轉(zhuǎn)運蛋白、多巴胺及堿性成纖維細胞生長因子在視網(wǎng)膜色素上皮中的表達。
　　 方法:隨機選取三周齡豚鼠30只,分為3組, A組:未行干預(yù)作為正常對照組;B組:右眼采用半透明自制眼罩遮蓋2周;C組:右眼采用半透明自制眼罩遮蓋1周,去遮蓋1周。對各組進行視網(wǎng)膜檢影測屈光度、A超測量眼軸

2、及角膜曲率計測量角膜曲率。采用免疫組織化學(xué)法檢測多巴胺轉(zhuǎn)運蛋白在視網(wǎng)膜的表達定位,RT-PCR檢測多巴胺轉(zhuǎn)運蛋白mRNA的表達,Western blot法檢測多巴胺轉(zhuǎn)運蛋白及堿性成纖維細胞生長因子蛋白的表達及高效液相色譜-電化學(xué)法檢測多巴胺的含量。
　　 結(jié)果:平均屈光度A組為+0.917±0.303 D,B組為-3.541±0.579 D,C組為+0.750±0.223 D;B組與A組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05),其余各組

3、差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。眼軸長度A組為6.663±0.176mm,B組為8.045±0.318 mm,C組為6.767±0.118 mm;B組與A組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05),其余各組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。各組實驗眼角膜曲率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(F=0.583,P＞0.05)。多巴胺轉(zhuǎn)運蛋白主要表達于視網(wǎng)膜色素上皮層,脈絡(luò)膜中無表達;在B組呈強陽性表達,在其余各組呈陽性表達;B組多巴胺轉(zhuǎn)運蛋白免疫反應(yīng)增強主要

4、表現(xiàn)在視網(wǎng)膜色素上皮。豚鼠形覺剝奪性近視眼視網(wǎng)膜色素上皮多巴胺轉(zhuǎn)運蛋白及多巴胺較正常眼表達上調(diào)(P＜0.05),堿性成纖維細胞生長因子較正常眼表達下調(diào)(P＜0.05)。多巴胺轉(zhuǎn)運蛋白的表達水平與免疫組織化學(xué)的反應(yīng)強度呈密切正相關(guān)(r=0.893,P＜0.05);多巴胺轉(zhuǎn)運蛋白的表達水平與多巴胺含量呈密切正相關(guān)(r=0.902,P＜0.05);多巴胺轉(zhuǎn)運蛋白與堿性成纖維細胞生長因子的表達水平呈密切負相關(guān)(r=-0.976,P＜0.05)。

5、
　　 結(jié)論:1.多巴胺轉(zhuǎn)運蛋白、多巴胺及堿性成纖維細胞生長因子在豚鼠視網(wǎng)膜色素上皮均有表達;多巴胺轉(zhuǎn)運蛋白在脈絡(luò)膜中無表達。2.豚鼠形覺剝奪性近視眼視網(wǎng)膜色素上皮多巴胺轉(zhuǎn)運蛋白表達上調(diào),堿性成纖維細胞生長因子表達下調(diào);多巴胺轉(zhuǎn)運蛋白與堿性成纖維細胞生長因子的表達水平呈密切負相關(guān)。
　　 第二章、多巴胺轉(zhuǎn)運蛋白反義寡核苷酸對豚鼠形覺剝奪性近視眼視網(wǎng)膜色素上皮堿性成纖維細胞生長因子表達的調(diào)控
　　 目的:觀察外源性

6、多巴胺轉(zhuǎn)運蛋白反義寡核苷酸作用下,豚鼠形覺剝奪性近視眼視網(wǎng)膜色素上皮多巴胺轉(zhuǎn)運蛋白及堿性成纖維細胞生長因子的表達改變,探討多巴胺轉(zhuǎn)運蛋白對豚鼠形覺剝奪性近視眼視網(wǎng)膜色素上皮堿性成纖維細胞生長因子表達的調(diào)控。
　　 方法:隨機選取三周齡豚鼠50只,分為5組, A組:未行干預(yù)作為正常對照組;B組:右眼采用半透明自制眼罩遮蓋2周;C組:右眼采用半透明自制眼罩遮蓋2周,同時予玻璃體腔內(nèi)注射多巴胺轉(zhuǎn)運蛋白反義寡核苷酸,濃度為0.02nmo

7、l/ul;D組:右眼采用半透明自制眼罩遮蓋2周,同時予玻璃體腔內(nèi)注射多巴胺轉(zhuǎn)運蛋白核苷酸,濃度為0.02nmol/ul;E組:右眼采用半透明自制眼罩遮蓋2周,同時予玻璃體腔內(nèi)注射等量生理鹽水作為陰性對照。對各組進行視網(wǎng)膜檢影測屈光度、A超測量眼軸及角膜曲率計測量角膜曲率。采用RT-PCR檢測多巴胺轉(zhuǎn)運蛋白mRNA的表達;Western blot法檢測多巴胺轉(zhuǎn)運蛋白及堿性成纖維細胞生長因子蛋白的表達及高效液相色譜-電化學(xué)法檢測多巴胺的含量

8、;并采用TUNEL染色,觀察多巴胺轉(zhuǎn)運蛋白反義寡核苷酸對視網(wǎng)膜有無毒性作用。
　　 結(jié)果:平均屈光度A組為+0.917±0.303 D,B組為-3.542±0.579 D,C組為-0.125±0.628 D,D組為-3.583±0.665 D,E組為-3.792±1.111D;B組、C組、D組及E組與A組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05),C組與B組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05),D組、E組與B組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0

9、.05)。A組實驗眼眼軸長度為6.625±0.108mm,B組為8.052±0.317 mm,C組為6.702±0.140 mm,D組為7.755±0.120 mm,E組為7.893±0.249 mm;B組、C組、D組及E組與A組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05),C組與B組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05),D組、E組與B組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。各組實驗眼角膜曲率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(F=0.305,P＞0.05)。多巴胺

10、轉(zhuǎn)運蛋白反義寡核苷酸可使豚鼠視網(wǎng)膜色素上皮多巴胺轉(zhuǎn)運蛋白mRNA及蛋白表達下調(diào)(P＜0.05),同時可使堿性成纖維細胞生長因子較正常眼表達上調(diào)(P＜0.05)。多巴胺轉(zhuǎn)運蛋白與堿性成纖維細胞生長因子蛋白的表達水平呈密切負相關(guān)(r=0.973,P＜0.05)。
　　 結(jié)論:1.多巴胺轉(zhuǎn)運蛋白反義寡核苷酸可抑制豚鼠由于形覺剝奪所引起的近視眼以及相應(yīng)的眼軸延長,同時可引起視網(wǎng)膜色素上皮中的多巴胺轉(zhuǎn)運蛋白表達下調(diào)及堿性成纖維細胞生長因子