黃曲霉毒素B1(AFB1)的分離、純化及AFB1人工抗原的高效合成研究.pdf

1、黃曲霉毒素（Aflatoxin，AFT）是目前已知的兩百多種真菌毒素中毒性最強(qiáng)、污染頻率最高，寄生曲霉真菌(A.parasiticus)和黃曲霉(Aspergillus flavus)等產(chǎn)生的一組化學(xué)結(jié)構(gòu)類(lèi)似的二級(jí)次生產(chǎn)物，通過(guò)飼料或食品嚴(yán)重危害動(dòng)物和人類(lèi)的生命安全。在天然污染的食品當(dāng)中，黃曲霉毒素B1（AFB1）最常見(jiàn)，其毒性、致癌、致畸性也最強(qiáng)。隨著生活水平的提高，食品安全已引起各國(guó)政府的特別關(guān)注。歐盟在2000年就提出了世界上最嚴(yán)

2、格的安全標(biāo)準(zhǔn)和檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)，其中AFB1為2μg/kg，總AFT4μg/kg。由于AFB1污染十分嚴(yán)重，為避免此狀況的發(fā)生，人們迫切需要研究出一種高效經(jīng)濟(jì)、快速、容易操作、精確且高普及性的AFB1檢測(cè)方法，對(duì)農(nóng)副作物及產(chǎn)品的運(yùn)輸、儲(chǔ)存、生產(chǎn)和銷(xiāo)售的各個(gè)渠道都能有效地監(jiān)查控制，使廣大消費(fèi)者最基本的健康問(wèn)題得到保障。AFB1檢測(cè)試劑盒具有快速、簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)等優(yōu)點(diǎn)備受青睞，但對(duì)于這種試劑盒的市場(chǎng)化開(kāi)發(fā)需要AFB1和AFB1抗體做原料。本實(shí)驗(yàn)把提取、

3、分離純化AFB1，AFB1的高利用率以及制備高效價(jià)、高特異性的抗體等因素綜合研究，為開(kāi)發(fā)AFB1檢測(cè)試劑盒提供了重要的材料來(lái)源。
　　本研究主要內(nèi)容包括：黃曲霉菌的培養(yǎng)及AFB1的提取純化；AFB1人工抗原的高效合成研究；以及AFB1抗血清的制備與研究。
　　在黃曲霉菌培養(yǎng)及AFB1的提取純化中：經(jīng)過(guò)真菌培養(yǎng)；毒素提取；氧化鋁柱層析、硅膠柱層析分離純化；TLC、HPLC檢測(cè)；等步驟獲得AFB1精制品，純度達(dá)到95％以上。

4、r>　　在AFB1人工抗原的制備研究過(guò)程中：首先經(jīng)過(guò)肟化反應(yīng)制備AFB1肟（AFB1-O），AFB1的利用率高達(dá)94.2%；然后用碳二亞胺法制備AFB1人工抗原；最后根據(jù)AFB1與修飾過(guò)的牛血清蛋白（C-BSA）的不同起始摩爾比反應(yīng)得到不同摩爾比的偶聯(lián)產(chǎn)物。
　　在AFB1抗血清的制備與研究過(guò)程中：將不同反應(yīng)摩爾比所得人工抗原(AFB1-BSA)刺激Balb/C小鼠產(chǎn)生高特異性抗體；酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)(ELISA)測(cè)定產(chǎn)生的抗血清效價(jià)；