無(wú)標(biāo)記阻抗型AFB1免疫傳感器的研究.pdf

1、本文概述了免疫傳感器和修飾電極的研究進(jìn)展及其應(yīng)用，分析了AFB1的檢測(cè)方法的優(yōu)缺點(diǎn)，主要是研究了“鏈狀”聚鄰苯二胺（PoPD）修飾電極和AFB1免疫傳感器的制備條件，并采用電化學(xué)阻抗譜（EIS）法對(duì)AFB1進(jìn)行了定量檢測(cè)，取得了良好的檢測(cè)效果。
　　首先，采用循環(huán)伏安法制備PoPD修飾電極，研究表明在0.05mol/L o-PD+1mol/L H2SO4電聚合溶液中，-600mV~1000mV的電位范圍下，以50mV/s掃描速率，

2、循環(huán)30周可以得到含有大量氨基-NH2的“鏈狀”結(jié)構(gòu)的PoPD膜。該膜不僅具有良好的滲透選擇性能，可以使H+選擇滲透進(jìn)入膜內(nèi)，而且對(duì)H+/H的氧化還原反應(yīng)具有催化作用。
　　然后，基于PoPD修飾電極，研究了AFB1免疫傳感器的制備條件和AFB1抗原的固定條件。結(jié)果表明在25℃下，戊二醛的交聯(lián)、anti-AFB1純化抗體的固定和小牛血清的封閉，三者的操作時(shí)間應(yīng)為45min；80％PBS+20%甲醇作為反應(yīng)溶液，pH=7.40，結(jié)合

3、溫度為30℃可以獲得最大的AFB1抗原固定量。
　　其次，對(duì)AFB1免疫傳感器的組裝過(guò)程中發(fā)生的反應(yīng)進(jìn)行了研究。戊二醛與PoPD/Au電極進(jìn)行交聯(lián)和抗體固定時(shí)，戊二醛的兩個(gè)醛基-CHO分別與PoPD的氨基-NH2以及抗體免疫球蛋白的殘余氨基-NH2發(fā)生了席夫堿反應(yīng)，形成了穩(wěn)定的Ar-N=C(CH2)3C=N-R結(jié)構(gòu)，從而將抗體固定在了電極表面，形成了具有分子識(shí)別功能的AFB1免疫傳感器。
　　再次，采用EIS法，對(duì)AFB1免

4、疫傳感器的組裝過(guò)程進(jìn)行了電化學(xué)表征并構(gòu)建了分子識(shí)別膜的界面模型。PoPD/Au電極表面隨著戊二醛交聯(lián)、anti-AFB1抗體固定及小牛血清封閉的進(jìn)行，電子傳遞電阻逐層增大；在進(jìn)行AFB1抗原的特異性免疫反應(yīng)時(shí)，電子傳遞電阻隨著AFB1的免疫結(jié)合量的增加而增大；由于H+的非特異性吸附以及電極表面的不均勻的影響，AFB1免疫傳感器的EIS譜圖具有明顯的“彌散效應(yīng)”。
　　最后，利用AFB1免疫傳感器，采用EIS法對(duì)AFB1進(jìn)行了檢測(cè)。

5、結(jié)果顯示，在0.03μg/mL~0.7μg/mL范圍內(nèi)具有兩段線性關(guān)系。當(dāng)濃度范圍為0.03μg/mL~0.1μg/mL時(shí)，線性方程為ΔRP=-5960Ω+2.75×1011×cAFB1，R2=0.9946；當(dāng)濃度范圍為0.1μg/mL~0.7μg/mL時(shí)，線性方程為ΔRP=19410Ω+2.49×1010×cAFB1，R2=0.9807；最低檢測(cè)限LOD為2.75×10-8g/mL。
　　另外，對(duì)AFB1免疫傳感器免疫傳感器的解