染色體端粒長(zhǎng)度與肝癌發(fā)病及預(yù)后關(guān)系的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、肝癌因其起病隱匿、病情發(fā)展快和缺乏有效的治療手段等臨床特點(diǎn)嚴(yán)重危害人民健康。因此，對(duì)肝癌發(fā)生發(fā)展分子機(jī)制的研究并結(jié)合肝癌患者臨床資料尋找有效的高危人群篩查和預(yù)后判斷的標(biāo)志物具有重要意義。
　　端粒長(zhǎng)度異常參與肝癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程。除病毒感染、酗酒、黃曲霉素、吸煙和藥物等環(huán)境因素外，越來(lái)越多的研究關(guān)注遺傳易感因素在肝癌發(fā)生發(fā)展中的作用。以往大量臨床研究表明，端粒長(zhǎng)度異常所致的基因組不穩(wěn)定參與多種腫瘤的發(fā)生及進(jìn)展；尤其是外周血的平均端粒長(zhǎng)

2、度可能作為潛在生物標(biāo)志物預(yù)測(cè)多種惡性腫瘤的發(fā)病及預(yù)后。此外，多項(xiàng)研究證實(shí)端粒長(zhǎng)度在肝硬化、癌旁以及肝癌組織中進(jìn)行性縮短，說(shuō)明端粒長(zhǎng)度參與了肝癌的發(fā)生及進(jìn)展。然而關(guān)于外周血的平均端粒長(zhǎng)度和肝癌發(fā)生發(fā)展關(guān)系的研究尚未見(jiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)正是基于這個(gè)研究現(xiàn)狀，利用外周血樣本進(jìn)一步探討外周血的平均端粒長(zhǎng)度是否參與了肝癌的發(fā)生及進(jìn)展，并初步評(píng)估外周血的平均端粒長(zhǎng)度在對(duì)肝癌預(yù)防、早期高危人群篩查和肝癌預(yù)后的意義。本課題研究包括兩部分：
　　第一部分

3、：染色體端粒長(zhǎng)度與肝癌發(fā)病關(guān)系的研究
　　本實(shí)驗(yàn)采用病例對(duì)照研究方法，選取240例HBV(Hepatitis B virus)感染的肝癌患者作為病例組、120例HBV感染的慢性肝疾病患者作為慢性肝疾病對(duì)照組和240例健康人群作為健康對(duì)照組，收集3組人群的外周血樣本、提取基因組DNA以及相關(guān)的流行病學(xué)資料，利用實(shí)時(shí)定量PCR的方法檢測(cè)3組樣本的平均端粒長(zhǎng)度。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，肝癌病例組外周血的平均端粒長(zhǎng)度顯著長(zhǎng)于慢性肝疾病組和健康對(duì)照組；同

4、端粒長(zhǎng)度短的人相比，端粒長(zhǎng)度較長(zhǎng)的人肝癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)顯著升高，以健康人群為對(duì)照時(shí)，OR(odd ratio)值是7.28、95％CI(confidence interval)為4.46-11.8，以慢性肝疾病人群為對(duì)照時(shí)，OR值是2.86，95％CI為1.74-4.70；平均端粒長(zhǎng)度越長(zhǎng)肝癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)越高，呈現(xiàn)劑量依賴(lài)的關(guān)系(P for trend<0.001 in both controls)。此外，外周血和正常肝組織的端粒長(zhǎng)度相關(guān)性為0.

5、78(P<0.001)，外周血和肝硬化組織的端粒長(zhǎng)度相關(guān)性達(dá)0.67(P=0.001)。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，在預(yù)測(cè)肝癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)上端粒長(zhǎng)度和吸煙或飲酒具有聯(lián)合效應(yīng)?？傊緦?shí)驗(yàn)首次采用流行病學(xué)的研究方法證明外周血的平均端粒長(zhǎng)度越長(zhǎng)與肝癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)升高顯著相關(guān)。
　　第二部分：染色體端粒長(zhǎng)度與肝癌預(yù)后關(guān)系的研究
　　本實(shí)驗(yàn)收集228例肝癌患者的外周血樣本并提取基因組DNA，并對(duì)這些肝癌患者進(jìn)行常規(guī)隨訪調(diào)查和流行病學(xué)資料的收集，利用實(shí)時(shí)

6、定量PCR的方法檢測(cè)肝癌患者的平均端粒長(zhǎng)度。其中，20例患者因失訪或臨床資料不全被去除，6例患者因DNA質(zhì)量不佳被去除，最后分析了202例患者的隨訪資料和外周血平均端粒長(zhǎng)度的關(guān)系。多變量COX回歸分析表明：外周血的平均端粒長(zhǎng)度越長(zhǎng)的患者其預(yù)后越差[HR(Hazard Ratio)95％CI:2.18(0.78-1.49);P<0.001]；此外，外周血端粒長(zhǎng)度、Child-Pugh評(píng)分、腫瘤大小、門(mén)靜脈癌栓、以及血清甲胎蛋白(alpha

7、-fetoprotein,AFP)水平均是影響肝癌總體生存率的獨(dú)立危險(xiǎn)因子。分層分析發(fā)現(xiàn)：外周血的平均端粒長(zhǎng)度越長(zhǎng)的肝癌患者其預(yù)后越差，尤其在嚴(yán)重的肝癌患者中(如伴有肝硬化、腫瘤大、腫瘤數(shù)目多、AFP水平高、TNM分期Ⅲ和Ⅳ的患者)；Kaplan-Meier分析亦表明端粒長(zhǎng)度較長(zhǎng)的人群生存時(shí)間顯著短于端粒長(zhǎng)度較短的人群(P=0.002)，尤其在嚴(yán)重的肝癌患者中?？傊緦?shí)驗(yàn)首次表明外周血的平均端粒長(zhǎng)度越長(zhǎng)的肝癌患者預(yù)后越差，可作為肝癌預(yù)