丹蒲膠囊對EAP模型大鼠疼痛因子的影響的研究.pdf

1、慢性前列腺炎（Chronic Prostatitis，CP）是成年男性常見疾病之一，臨床主要表現(xiàn)為慢性盆腔疼痛，由于其發(fā)病機制尚不明確，目前很多治療對盆腔疼痛緩解遠期效果不佳。關(guān)于CP的發(fā)病機制有多種學(xué)說，但是每一種學(xué)說都不能完全解釋CP發(fā)病機制及其發(fā)展變化過程，目前主要側(cè)重于多元學(xué)說:感染因素、免疫因素、內(nèi)分泌因素及精神心理因素等多種因素共同作用相互影響而成。隨著分子生物學(xué)及免疫學(xué)的發(fā)展，免疫學(xué)說逐漸成為基礎(chǔ)研究的重點。
　　

2、 中醫(yī)藥憑借著獨特療效在治療CP方面有著一定的優(yōu)勢。我國著名中西醫(yī)結(jié)合泌尿外科專家劉猷枋教授自上個世紀六十年代開始，根據(jù)臨床上CP患者多表現(xiàn)為下腹、腰骶、會陰等部位疼痛，以及前列腺觸診多呈硬化改變及前列腺壓痛等癥狀，這種癥狀表現(xiàn)符合中醫(yī)血瘀證，結(jié)合CP病理改變?yōu)橄偾还Ｗ?，腺液滯留，間質(zhì)纖維化等特點，將宏觀辨證與微觀辨證相結(jié)合，研制而成前列腺湯，后劉教授為便于研究此處方及減輕藥物對胃腸道刺激，便簡化處方取其中6味，組方為丹蒲膠囊。

3、　　 導(dǎo)師張亞強主任醫(yī)師繼承了劉猷枋教授學(xué)術(shù)思想，承擔(dān)國家“七五”攻關(guān)課題、國家自然科學(xué)基金課題、北京市自然基金課題、國家中醫(yī)藥管理局課題，通過大量的臨床研究和動物實驗對丹蒲膠囊進行了深入的研究。丹蒲膠囊的臨床試驗顯示其能夠明顯改善CP患者的盆腔疼痛臨床癥狀，提高生活質(zhì)量?；A(chǔ)動物實驗發(fā)現(xiàn)其治療CP是通過調(diào)節(jié)免疫作用。但是丹蒲膠囊能改善慢性盆腔疼痛癥狀的機理不是特別明確，本實驗通過制作改良的實驗性自身免疫性前列腺炎(Experimen

4、tal autoimmune prostatitis EAP)大鼠模型，對引起慢性盆腔疼痛綜合征(Chronic Pelvic Pain Syndrome CPPS)的相關(guān)疼痛因子研究，進一步揭示丹蒲膠囊的治療機制。
　　 目的:探索EAP動物模型的制作方法，通過研究丹蒲膠囊對改良的EAP模型大鼠疼痛因子神經(jīng)生長因子(Nerve Growth Factor NGF)、白介素-6(IL-6Interleukin-6)及β-內(nèi)啡肽（

5、β-endorphinβ-EP）的影響，揭示丹蒲膠囊改善CPPS的機制。
　　 方法:采用純化大鼠前列腺蛋白與完全弗氏佐劑的勻漿注射前列腺聯(lián)合不完全弗氏佐劑皮下注射加強免疫法建立EAP大鼠模型，將大鼠隨機分為丹蒲膠囊高劑量組、中劑量組、低劑量組、陽性藥物組、模型組、正常組，給藥8周后處死大鼠，取血及前列腺組織，光鏡下觀察各組動物前列腺組織形態(tài)學(xué)變化，酶聯(lián)免疫吸附試驗(Enzyme-linked Immunosorbent Ass

6、ay ELISA)檢測血清及前列腺組織NGF、IL-6及β-EP水平、實時逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(real-time RT-PCR)法測定NGF-mRNA、IL-6-mRNA表達水平。
　　 結(jié)果:
　　 1、ELISA法測定NGF表達水平結(jié)果顯示:模型組血清和前列腺組織中NGF表達水平明顯增高，與正常組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);藥物治療后，丹蒲膠囊高劑量、陽性藥物組的血清及前列腺組織NGF表達水平明顯低于模型

7、組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);丹蒲膠囊低劑量組與模型組比較，血清及前列腺組織NGF表達水平差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 2、ELISA法測定β-EP表達水平結(jié)果顯示:模型組血清和前列腺組織中β-EP表達水平明顯降低，與正常比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);藥物治療后，丹蒲膠囊高劑量、中劑量、陽性藥物組的血清及前列腺組織β-EP表達水平明顯高于模型組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);丹蒲膠囊低劑量

8、組與模型組比較，血清及前列腺組織β-EP表達水平差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 3、ELISA法測定組織IL-6表達水平結(jié)果顯示:模型組表達水平明顯降低，與正常組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);藥物治療后，丹蒲膠囊高劑量、陽性藥物組的表達水平明顯高于模型組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);而血清IL-6任意兩組之間比較差異均沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 4、RT-PCR法測定IL-6-m

9、RNA、NGF-mRNA結(jié)果顯示:模型組前列腺組織中IL-6-mRNA的CT值升高、NGF-mRNA的CT值降低，與正常組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);藥物治療后，丹蒲膠囊高劑量、陽性藥物組的前列腺組織IL-6-mRNA的CT值明顯低于模型組，NGF-mRNA的CT值明顯高于模型組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);丹蒲膠囊低劑量組與模型組比較，前列腺組織IL-6-mRNA、NGF-mRNA的CT值差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0

10、.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1、采用純化大鼠前列腺蛋白與完全弗氏佐劑的勻漿注射前列腺聯(lián)合不完全弗氏佐劑皮下注射加強免疫法成功建立實驗性自身免疫性前列腺炎大鼠模型。
　　 2、丹蒲膠囊能夠緩解CPPS，其機制可能與其抑制NGF表達、增加IL-6及β-EP表達有關(guān)。
　　 3、血清IL-6表達各組之間沒有差異，而組織中IL-6表達可見與其他疼痛因子表現(xiàn)出類似的結(jié)果，表明前列腺炎癥局部IL-6的變化可能并不