胃癌細(xì)胞中TRAF1基因的干擾對(duì)其凋亡和遷移功能的影響.pdf

1、研究背景與目的:胃癌是世界上最常見的惡性腫瘤之一，目前國(guó)內(nèi)外已有多項(xiàng)研究證實(shí)胃癌的發(fā)生與幽門螺桿菌(Helicobaeterpylori，H.pylori)有著密切的關(guān)系。本課題組通過前期研究發(fā)現(xiàn)正常胃粘膜上皮細(xì)胞株GES-1與胃癌組織來源的H.pylori共培養(yǎng)后可發(fā)生TRAF1基因上調(diào)的現(xiàn)象，并且在胃癌前病變及胃癌組織中有TRAF1表達(dá)增高的現(xiàn)象。而目前通過研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)TRAF1與多種腫瘤的發(fā)生與發(fā)展有相關(guān)關(guān)系。所以本課題擬建立TR

2、AF1基因干擾的瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的胃癌細(xì)胞模型來明確TRAF1在胃癌，特別是H.pylori相關(guān)的胃癌的發(fā)生和發(fā)展究竟存在怎樣的相關(guān)性。
　　 方法:首先我們通過Real-time PCR和Western-blot兩種方法來驗(yàn)證TRAF1在BGC823、SGC7901、MGC803三株胃癌細(xì)胞株的表達(dá)情況，并從中篩選TRAF1表達(dá)最高的一株細(xì)胞進(jìn)行后期實(shí)驗(yàn)。我們根據(jù)參考文獻(xiàn)構(gòu)建3個(gè)TRAF1 shRNA表達(dá)載體pLVX-shRNA2-T

3、RAF1-shRNA1-3，然后用Lipofectamine2000脂質(zhì)體將其分別轉(zhuǎn)染至目標(biāo)胃癌細(xì)胞株中，再應(yīng)用Real-time PCR和Western-blot來檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞中TRAF1基因在mRNA和蛋白水平的表達(dá)變化，以此來驗(yàn)證干擾的效果，并且篩選出干擾效率最強(qiáng)的TRAF1 shRNA來進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。經(jīng)檢測(cè)確定TRAF1被成功干擾后，我們可通過MTT法、流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)TRAF1對(duì)胃癌細(xì)胞增殖活力和凋亡的影響，通過Tran

4、swell遷移實(shí)驗(yàn)來檢測(cè)TRAF1對(duì)胃癌細(xì)胞遷移能力的影響。
　　 結(jié)果:
　　 1.在BGC823、SGC7901、MGC803三株胃癌細(xì)胞株中，TRAF1的表達(dá)較正常胃上皮細(xì)胞系GES-1均有上調(diào)，其中在BGC823細(xì)胞株中表達(dá)最高。
　　 2.根據(jù)參考文獻(xiàn)選取的3個(gè)TRAF1 shRNA對(duì)TRAF1基因均有干擾作用，其中以pLVX-shRNA2-TRAF1-shRNA2干擾效果最強(qiáng)。
　　 3.干擾

5、胃癌細(xì)胞BGC823中的TRAF1可使細(xì)胞生長(zhǎng)活力減弱，凋亡明顯增加。
　　 4.干擾胃癌細(xì)胞BGC823中的TRAF1對(duì)細(xì)胞的遷移功能無顯著影響。
　　 結(jié)論:在BGC823，SGC7901，MGC803三株胃癌細(xì)胞株中，TRAF1基因的表達(dá)均有上調(diào)的現(xiàn)象，并且以BGC823上調(diào)最明顯。通過體外干擾胃癌細(xì)胞株BGC823，我們可以發(fā)現(xiàn)TRAF1可抑制BGC823細(xì)胞的凋亡。這些研究提示TRAF1在胃癌的發(fā)展過程中有可能