結(jié)直腸癌中MicroRNA差異表達及miR139-5p相關(guān)Notch1基因檢測的臨床意義.pdf

1、目的：探討microRNA差異表達和miR-139-5p相關(guān)Notch1基因在結(jié)直腸癌中表達的臨床意義。
　　材料和方法：本實驗選擇14例診斷為結(jié)直腸癌的新鮮組織標本，其中包括2例高分化癌、10例中分化癌和2例低分化癌。應(yīng)用這些標本提取總RNA并轉(zhuǎn)化為cDNA。將得到的cDNA與含有3441種已知miRNA的芯片進行雜交檢測，隨后應(yīng)用實時定量PCR方法對差異表達的miRNAs進行驗證。同時，通過生物信息學(xué)的方法對差異表達的miRN

2、As進行靶向預(yù)測。在本實驗中，我們選擇了在結(jié)直腸癌中明顯低表達的miR139-5p及其靶向的Notch1基因作為深入研究的對象，并應(yīng)用免疫組化 EnVision法檢測 Notch1蛋白在結(jié)直腸癌及癌旁正常組織中的表達水平，分析其蛋白檢測結(jié)果在結(jié)直腸癌中的臨床病理學(xué)意義。
　　結(jié)果：MicroRNA芯片檢測結(jié)果表明，194種 miRNAs的表達顯著增加而38種miRNAs的表達顯著降低。表達顯著增加的miRNAs主要有hsa-miR

3、-31、hsa-miR-105和hsa-miR-196b等；顯著降低的主要有hsa-miR-139-5p和hsa-miR-215等。通過生物信息學(xué)的方法對hsa-miR-139-5p的靶基因進行預(yù)測，通過TARGET SCAN靶基因預(yù)測網(wǎng)站檢索和比對發(fā)現(xiàn)：與 hsa-miR-139-5p密切相關(guān)的基因有 NOTCH1、TMF1、USP6NL等。本實驗中我們選擇了 NOTCH1蛋白作為進一步實驗的對象。免疫組化結(jié)果發(fā)現(xiàn)：miR-139-5

4、p相關(guān)蛋白Notch1定位在細胞漿，在結(jié)直腸癌和正常結(jié)直腸組織中的陽性率分別為57.3％（43/75）和71.1%（27/38）。Notch1在有、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌中的強陽性率分別為21.6%（8/37）和55.3%（21/38）（P<0.05）。Notch1蛋白在早期和晚期結(jié)直腸癌中的強陽性率分別為57.9%（22/38）和21.6%（15/56）(P<0.05)；同時，它在生存率大于5年的結(jié)腸癌病例中的強陽性率（59.4%，1

5、9/32）明顯高于生存率小于5年的病例（23.3%，10/43）。但Notch1在高、中、低分化結(jié)直腸癌中的表達無統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)，其強陽性率分別為36.0%(9/25)，44.4%(12/27)和34.8%(8/23)。
　　結(jié)論：與正常組織相比，在結(jié)直腸癌中存在明顯的差異miRNAs表達譜。因此，MicroRNAs差異表達的檢測將為結(jié)直腸癌的臨床篩查及早期診斷提供理論參考指標。另外，在結(jié)直腸癌中顯著降低表達的miR-