不可預(yù)知的慢性溫和應(yīng)激對(duì)小鼠海馬5-HT轉(zhuǎn)載體蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、前言:
　　抑郁癥是一種全球流性的精神疾病。據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì)，2020年此病將成為僅次于心血管疾病對(duì)人類危害最大的疾病。盡管抑郁癥病因研究已取得了相當(dāng)大的進(jìn)展，但由于病因的復(fù)雜性，潛在的病理機(jī)制尚不清楚。例如，我們對(duì)不同人群抑郁癥發(fā)病敏感性和對(duì)抗抑郁藥物反應(yīng)的差異等方面仍知之甚少。
　　大腦神經(jīng)遞質(zhì)系統(tǒng)的改變，如五羥色胺(5-HT)神經(jīng)系統(tǒng)的變化，已被證實(shí)參與了抑郁癥的發(fā)病機(jī)制。5-HT轉(zhuǎn)載體(5-HTT)是5-HT神經(jīng)系

2、統(tǒng)的重要成員，它通過調(diào)節(jié)突觸間隙內(nèi)5-HT的濃度，從而影響其相關(guān)的神經(jīng)信號(hào)傳遞。研究表明，抑郁癥發(fā)病過程中5-HTT發(fā)生了改變，但在發(fā)病和治療過程中其表達(dá)的確切變化目前尚不清楚。
　　臨床研究表明，抑郁癥患者5-HTT的改變趨勢(shì)報(bào)道不一。臨床前期研究表明，通過不同的分子生物學(xué)方法敲除5-HTT基因的兩個(gè)小鼠種系，都表現(xiàn)為明顯的抑郁行為，可能提示腦內(nèi)5-HTT參與了正常神經(jīng)精神狀態(tài)的維持。然而，在胚胎細(xì)胞內(nèi)敲除此基因可能導(dǎo)致小鼠發(fā)育

3、過程中出現(xiàn)代償性的改變，這可能會(huì)對(duì)基因敲除小鼠的行為產(chǎn)生影響。
　　抑郁癥動(dòng)物模型用于:1）模擬人類抑郁癥的多種特定核心癥狀;2）研究已知抗抑郁藥物的作用及新的抗抑郁藥物的研發(fā)。不可預(yù)知的慢性溫和應(yīng)激(UCMS)抑郁模型是目前最為公認(rèn)的抑郁癥動(dòng)物模型，該模型不僅成功模擬抑郁癥的核心癥狀-快感缺乏，還模擬了不同人群對(duì)抑郁癥發(fā)病的敏感性和對(duì)抗抑郁藥反應(yīng)的差異，故而可以幫助我們識(shí)別此病的不同分子改變。
　　大腦海馬(hippoca

4、mpus)接受位于中縫核的5-HT神經(jīng)元支配，并參與人類情緒及下丘腦-垂體-腎上腺皮質(zhì)軸(HPA)的調(diào)控。本實(shí)驗(yàn)采用CD-1小鼠建立UCMS抑郁模型，通過測(cè)定CD-1小鼠海馬5-HTT蛋白的表達(dá)來明確抑郁發(fā)病過程中5-HTT蛋白水平的變化，并建立此蛋白的變化與發(fā)病易感性兩者間的相關(guān)性。
　　方法:
　　成年雄性CD-1小鼠，年齡在2-3月間，隨機(jī)分為對(duì)照組和UCMS組。對(duì)照組正常飼養(yǎng)，UCMS組每天隨機(jī)給予2～3種應(yīng)激刺激。

5、六周后，根據(jù)蔗糖偏好指數(shù)(sucrose preference index)和皮毛狀態(tài)(physical state of the coat)的綜合評(píng)分將小鼠分為“抑郁”（出現(xiàn)快感喪失）和“堅(jiān)強(qiáng)”（無快感喪失）組，繼而對(duì)兩組和對(duì)照組分別進(jìn)行四周（第7-10周）氟西汀(FLX，10 mg/kg/day, i.p.)或生理鹽水(Saline，0.9％NaCl，i.p.)治療。我們?nèi)匀徊捎谜崽瞧脤?shí)驗(yàn)和皮毛狀態(tài)測(cè)試對(duì)FLX的治療功效進(jìn)行評(píng)估。

6、十周后，斷頭取出小鼠雙側(cè)海馬，并在裂解液中勻漿。勻漿后的樣品進(jìn)行Western Blot免疫印跡法半定量檢測(cè)5-HTT蛋白的表達(dá)。使用SPSS12.0軟件進(jìn)行多變量統(tǒng)計(jì)分析，p＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1、蔗糖偏好指數(shù)的變化
　　四周時(shí)給予UCMS的部分小鼠蔗糖偏好指數(shù)顯著降低，在之后的兩周內(nèi)蔗糖偏好指數(shù)進(jìn)一步下降。參考文獻(xiàn)報(bào)道，蔗糖偏好指數(shù)作為抑郁行為的指標(biāo)之一，其值用于評(píng)價(jià)小鼠是否出現(xiàn)快感

7、喪失。蔗糖偏好指數(shù)＜60％的CD-1小鼠是出現(xiàn)快感喪失的“抑郁”小鼠;蔗糖偏好指數(shù)≥60％者為未出現(xiàn)快感喪失的“堅(jiān)強(qiáng)”小鼠。六周時(shí)“抑郁”組與對(duì)照組和“堅(jiān)強(qiáng)”組相比，蔗糖偏好指數(shù)顯著下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。四周（第7-10周）FLX治療，對(duì)FLX作用敏感[FLX(+)]的“抑郁”組CD-1小鼠蔗糖偏好指數(shù)顯著回升至60％以上，快感喪失狀態(tài)消失;對(duì)FLX作用不敏感[FLX(-)]的“抑郁”組CD-1小鼠蔗糖偏好指數(shù)仍持續(xù)顯著低于60％以下

8、，快感喪失狀態(tài)存在;對(duì)照組和“堅(jiān)強(qiáng)”組FLX治療后蔗糖偏好指數(shù)變化無明顯變化。
　　2、皮毛狀態(tài)的改變
　　六周時(shí)“抑郁”組CD-1小鼠皮毛狀態(tài)重度不整齊，得分值顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。四周（第7-10周）FLX治療后，F(xiàn)LX(+)的“抑郁”組CD-1小鼠皮毛狀態(tài)恢復(fù)正常狀態(tài)，得分值顯著下降;而FLX(-)小鼠皮毛狀態(tài)得分值無明顯變化。
　　3、體重的變化
　　“抑郁”組的小鼠體重增長(zhǎng)幅度明顯低于對(duì)照組和“堅(jiān)

9、強(qiáng)”組。FLX治療后“抑郁”組中FLX(-)小鼠的體重增加幅度緩慢，而FLX(+)小鼠的體重增加幅度明顯升高，但仍低于相對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)的對(duì)照組和“堅(jiān)強(qiáng)”組。
　　4、海馬5-HTT蛋白表達(dá)的改變
　　六周UCMS后，與對(duì)照組相比，“堅(jiān)強(qiáng)”組小鼠海馬5-HTT蛋白的表達(dá)明顯升高，“抑郁”組小鼠海馬5-HTT蛋白的表達(dá)明顯下降。FLX治療后，“抑郁”組中對(duì)FLX(+)小鼠海馬5-HTT的蛋白表達(dá)回升至對(duì)照組水平，F(xiàn)LX(-)小鼠海馬