應(yīng)激適應(yīng)中單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的作用及5-HT對(duì)海馬GR-MR和BDNF表達(dá)的影響.pdf

1、第一章單次及重復(fù)限制性應(yīng)激對(duì)大鼠前額葉、海馬、下丘腦單胺類遞質(zhì)水平及其代謝產(chǎn)物的影響。 目的:通過測評(píng)單次及重復(fù)限制性應(yīng)激中，前額葉、海馬、下丘腦等腦區(qū)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)及其代謝產(chǎn)物的水平，探索單胺類神經(jīng)遞質(zhì)在急、慢性應(yīng)激適應(yīng)中的作用。 方法 24只雄性SD大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、單次應(yīng)激組和重復(fù)應(yīng)激組，每組8只。采用限制應(yīng)激模型(6小時(shí)/次/天)，單次應(yīng)激組給予1次應(yīng)激，重復(fù)應(yīng)激組給予連續(xù)應(yīng)激10天。在最后一次應(yīng)激24小時(shí)

2、后進(jìn)行行為學(xué)測試，測試后立即斷頭取腦，采用庫侖陣列電化學(xué)高效液相色譜分析方法分析前額葉、海馬和下丘腦組織勻漿的單胺類神經(jīng)遞質(zhì)及其代謝產(chǎn)物的濃度。統(tǒng)計(jì)分析采用單因素方差分析及多重兩兩比較。 結(jié)果:曠場實(shí)驗(yàn)中，單次應(yīng)激組在中央格停留的時(shí)間明顯低于對(duì)照組(P<0.01)，重復(fù)應(yīng)激組在中央格停留的時(shí)間與對(duì)照組無顯著性差異(P>0.05)；高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)中，單次應(yīng)激組在閉臂停留的時(shí)間高于對(duì)照組(P<0.01)，在開臂停留的時(shí)間低于對(duì)照組

3、(P<0.01)：重復(fù)應(yīng)激組大鼠在開/閉臂停留的時(shí)間與對(duì)照組無顯著性差異(P>0.05)。遞質(zhì)分析顯示，單次應(yīng)激組前額葉、海馬 5-HT 及其代謝產(chǎn)物5-HIAA 的含量高于對(duì)照組(P<0.01)，前額葉和下丘腦的MHPG水平、下丘腦的NE水平高于對(duì)照組(P<0.01或P<0.05)；重復(fù)應(yīng)激組海馬的5-HT及5-HIAA高于對(duì)照組(P<0.01)，前額葉、下丘腦5-HT及5-HIAA 與對(duì)照組無顯著性差異(P>0.05)；前額葉DA水

4、平低于對(duì)照組(P<0.01)；海馬的兒茶酚胺類遞質(zhì)濃度及代謝產(chǎn)物分別在對(duì)照組與單次應(yīng)激組、對(duì)照組與重復(fù)應(yīng)激組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 結(jié)論:①急性應(yīng)激能增加大鼠的焦慮水平，產(chǎn)生明顯的應(yīng)激反應(yīng)，而重復(fù)暴露于相同負(fù)性事件能夠?qū)е聦?duì)該刺激的適應(yīng)。②急、慢性應(yīng)激引起的海馬5-HT及其代謝產(chǎn)物水平的增加，可能是個(gè)體對(duì)應(yīng)激適應(yīng)的生物學(xué)基礎(chǔ)。 第二章重復(fù)應(yīng)激對(duì)5-HT耗竭大鼠情緒認(rèn)知及其海馬GR、MR和BDNF表達(dá)的影響

5、。 目的:通過研究慢性限制應(yīng)激對(duì)5-HT耗竭大鼠情緒、認(rèn)知等行為的影響及對(duì)大鼠海馬GR/MR受體、BDNF mRNA表達(dá)的影響，進(jìn)一步驗(yàn)證5-HT在應(yīng)激適應(yīng)中的作用，探索應(yīng)激過程中5-HT對(duì)海馬作用的分子機(jī)制。 方法:成年SD大鼠，按體重匹配原則隨機(jī)分為對(duì)照組、應(yīng)激組、5-HT 耗竭組和5-HT耗竭應(yīng)激等4組，使用對(duì)氯苯丙胺(p-PCA，200mg/kg)給予連續(xù)2天腹腔注射以耗竭大鼠體內(nèi)的5-HT。采用限制應(yīng)激模型(6

6、小時(shí)/天，連續(xù)10天)。最后一次應(yīng)激24小時(shí)后，采用曠場實(shí)驗(yàn)、高架十字迷宮、糖水偏好實(shí)驗(yàn)、強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)和水迷宮測試等進(jìn)行行為學(xué)測試評(píng)估大鼠的情緒及認(rèn)知水平。采用免疫組化方法比較各組間海馬各區(qū) GR/MR蛋白免疫反應(yīng)性；采用原位雜交方法比較各組間海馬各區(qū)BDNF mRNA 的表達(dá)情況。統(tǒng)計(jì)分析采用雙因素方差分析(Two-way ANOVA)。 結(jié)果: 5-HT 耗竭應(yīng)激大鼠相對(duì)于正常應(yīng)激大鼠體重增加較少；曠場實(shí)驗(yàn)中，在中央格的停留

7、時(shí)間較少；高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)中，在開臂停留的時(shí)間較少，在閉臂停留的時(shí)間較多；糖水實(shí)驗(yàn)中，消耗的糖水較少；強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)中，不動(dòng)的時(shí)間較長。另外，在水迷宮測試的第3、4天，5-HT 耗竭應(yīng)激大鼠比正常應(yīng)激大鼠平均逃離潛伏期明顯增加，而測試時(shí)，在目標(biāo)象限停留的時(shí)間和穿越平臺(tái)的次數(shù)明顯減少。免疫組化顯示，應(yīng)激組海馬CA1(p<0.05)、CA2(p<0.05)、CA3(p<0.01)、CA4(19<0.01)和DG(p<0.01)區(qū)GR免疫反應(yīng)性

8、分別高于對(duì)照組的CA1、CA2、CA3、CA4和DG，在5-HT耗竭組與對(duì)照組、5-HT 耗竭組與5-HT耗竭/應(yīng)激組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；海馬各區(qū)MR灰度值在上述4組間均無顯著性差異(P>0.05)。原位雜交顯示，5-HT耗竭/應(yīng)激組BDNF mRNA在海馬CA1、CA2、CA3、CA4和DG各區(qū)的表達(dá)分別低于耗竭組的CA1、 CA2、CA3、CA4和DG(p<0.01).在應(yīng)激組與對(duì)照組、5-HT耗竭組與對(duì)照組之間BDNFmRNA在

9、海馬各區(qū)的灰度值無顯著性差異(P>0.05)。 結(jié)論:①本研究表明5-HT耗竭使大鼠不能對(duì)重復(fù)應(yīng)激適應(yīng)，應(yīng)激后抑郁、焦慮水平顯著升高，且易導(dǎo)致學(xué)習(xí)、記憶等認(rèn)知功能受損。②5-HT耗竭大鼠在重復(fù)應(yīng)激反應(yīng)中，海馬GR受體功能受到抑制、BDNF mRNA的表達(dá)下調(diào)，提示可能是5-HT水平低下個(gè)體，對(duì)應(yīng)激適應(yīng)能力下降而增加應(yīng)激相關(guān)精神障礙易感性的生物學(xué)基礎(chǔ)。 第三章 5-HT1A 受體激動(dòng)劑對(duì)5-HT耗竭重復(fù)限制應(yīng)激大鼠海馬GR

10、、MR和BDNF表達(dá)的影響。 目的:通過皮下注射5-HT1A 受體激動(dòng)劑8-OH-DPAT和拮抗劑WAY100635，研究突觸后5-HT1A 受體功能對(duì)5-HT耗竭重復(fù)應(yīng)激大鼠海馬GR、MR和BDNF mRNA表達(dá)的影響。 方法:將成年SD大鼠按體重匹配原則隨機(jī)分為以下7組：對(duì)照組(Control)、應(yīng)激組(Stress)、8-OH-DPAT組(DPAT)、應(yīng)激+8-OH-DPAT 組(Stress+DPAT)、WAY1

11、00635(WAY100635)、應(yīng)激+WAY100635 組(Stress+WAY100635)、應(yīng)激+WAY100635+8-OH-DPAT 組(Stress+WAY100635+DPAT)。8-OH-DPAT每次于應(yīng)激前半小時(shí)皮下注射200ug/kg，WAY100635每次于應(yīng)激前15分鐘皮下注射300ug/kg，對(duì)照組給予2ml/kg 的生理鹽水皮下注射(給藥時(shí)間同8-OH-DPALT)。應(yīng)激模式采用重復(fù)限制應(yīng)激。采用免疫組化方

12、法比較各組間海馬各區(qū)GR/MR蛋白免疫反應(yīng)性，采用原位雜交方法比較各組間海馬各區(qū)BDNF mRNA的表達(dá)情況。統(tǒng)計(jì)采分析用單因素方差分析及多重兩兩比較。 結(jié)果:①8-OH-DPAT 組體重增加值高于對(duì)照組(P<0.01)，應(yīng)激+8-OH-DPAT組體重增加值高于應(yīng)激組(P<0.01)，其余各組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。②8-OH-DPAT能顯著減少5-HT耗竭大鼠及 5-HT 耗竭應(yīng)激大鼠在曠場實(shí)驗(yàn)和高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)中

13、的焦慮水平，并能使5-HT耗竭大鼠及5-HT耗竭應(yīng)激大鼠的糖水消耗量增加，減少在強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)中總不動(dòng)時(shí)間，而給予WAY100635則能阻斷8-OH-DPAT 的上述作用。在水迷宮實(shí)驗(yàn)中，各組找到平臺(tái)的平均潛伏期、在目標(biāo)象限的時(shí)間和穿越平臺(tái)的次數(shù)等差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。③免疫組化顯示，在海馬CA1、CA2及CA3區(qū)，應(yīng)激+8-OH-DPAT 組的GR灰度值低于應(yīng)激組(P<0.05)。在其余各對(duì)照組之間、各應(yīng)激組之間海馬各區(qū)中

14、，GR灰度值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；各對(duì)照組之間、各應(yīng)激組之間海馬各區(qū)MR灰度值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。原位雜交顯示，在海馬CA1、CA2、CA3、CA4及DG區(qū)，應(yīng)激+8-OH-DPAT組的BDNF mRNA灰度值低于應(yīng)激組(P<0.05)。其余對(duì)照組之間、各應(yīng)激組之間海馬各區(qū)的BDNFmRNA 灰度值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 結(jié)論:突觸后5-HT1A 受體的激活有利于保護(hù)海馬，促使其發(fā)揮正常的功