絲素纖維與外周神經(jīng)組織的體外生物相容性研究.pdf

1、第一部分絲素纖維與背根神經(jīng)節(jié)的體外組織相容性研究 目的:本實驗旨在研究絲素纖維與背根神經(jīng)節(jié)的體外組織相容性，初步探討絲素纖維作為修復(fù)周圍神經(jīng)損傷橋接物的可行性。 方法:取新生1．2天SD大鼠背根神經(jīng)節(jié)(DRG)與絲素纖維共培養(yǎng)21天，培養(yǎng)過程中每天倒置顯微鏡觀察，分別在培養(yǎng)4天、7天時拍照，并進(jìn)行掃描電鏡、免疫熒光染色激光共聚焦顯微鏡觀察，培養(yǎng)21天標(biāo)本透射電鏡觀察。 結(jié)果:通過光鏡、電鏡觀察，發(fā)現(xiàn)背根神經(jīng)節(jié)與絲

2、素纖維共培養(yǎng)4天后，有大量的細(xì)胞從背根神經(jīng)節(jié)中爬出，并沿著絲素纖維向遠(yuǎn)處遷移；培養(yǎng)7天則可看到更多細(xì)胞從組織塊爬出，纏繞并層層包裹絲素纖維。免疫細(xì)胞化學(xué)染色及掃描電鏡形態(tài)觀察，提示這一類細(xì)胞主要為雪旺氏細(xì)胞。培養(yǎng)21天，透射電鏡下可見絲素纖維周圍的細(xì)胞突起伸入到神經(jīng)軸突間，部分或全部包繞軸突，同時，細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)未見異常。 結(jié)論:雪旺氏細(xì)胞從背根神經(jīng)節(jié)中爬出，并沿著絲素纖維包裹生長，提示絲素纖維與背根神經(jīng)節(jié)組織具有較好的相容性。

3、 第二部分絲素浸出液對雪旺氏細(xì)胞的影響 目的:研究絲素浸出液對雪旺氏細(xì)胞生長、增殖及部分細(xì)胞功能的影響，以判斷絲素材料對雪旺氏細(xì)胞是否存在毒性作用，為其能否作為生物材料應(yīng)用于外周神經(jīng)修復(fù)作進(jìn)一步探討。 方法:取1．2天新生SD大鼠坐骨神經(jīng)，獲得生長旺盛的雪旺氏細(xì)胞，光鏡觀察在絲素浸出液中生長雪旺氏細(xì)胞的形態(tài)變化，并在培養(yǎng)24h、48h、72h拍照；MTT法檢測雪旺氏細(xì)胞在絲素浸出液中生長12h、24h、48h、72

4、h及7天后的細(xì)胞活力；流式細(xì)胞儀檢測雪旺氏細(xì)胞浸出液中培養(yǎng)24h后細(xì)胞周期變化及S100陽性細(xì)胞比例RT-PCR檢測絲素浸出液中培養(yǎng)12h、24h、48h后雪旺氏細(xì)胞表達(dá)NGF、BDNF及S．100蛋白mRNA的變化WesternBlot及免疫細(xì)胞化學(xué)染色檢測浸出液中生長24h、48h及72h雪旺氏細(xì)胞表達(dá)NGF、BDNF及S．100蛋白變化。 結(jié)果:光鏡下觀察雪旺氏細(xì)胞在絲素浸出液中培養(yǎng)24h、48h、72h，其形態(tài)與普通培養(yǎng)

5、基中生長的細(xì)胞無顯著差別MTT檢測結(jié)果顯示浸出液中生長12h、24h、48h、72h及7d，細(xì)胞活力沒有發(fā)生明顯改變；細(xì)胞周期檢測提示細(xì)胞周期各期雪旺氏細(xì)胞的比例沒有受絲素浸出液的影響RT-PCR、WesternBlot、免疫組織化學(xué)染色結(jié)果提示浸出液中雪旺氏細(xì)胞表達(dá)NGF、BDNF及S一100mRNA及蛋白表達(dá)量與普通培養(yǎng)基中生長的雪旺氏細(xì)胞相比沒有顯著差異。 結(jié)論:雪旺氏細(xì)胞在絲素浸出液中生長沒有觀察到形態(tài)改變；也未發(fā)現(xiàn)細(xì)胞