間充質(zhì)干細(xì)胞向食道組織細(xì)胞的誘導(dǎo)分化及其在食道組織再生中的應(yīng)用.pdf

1、目的：
　　探討間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）向食道平滑肌細(xì)胞、上皮細(xì)胞誘導(dǎo)分化的有效方法和機(jī)制，為食道組織工程提供種子細(xì)胞；探索電紡絲纖維、脫細(xì)胞食道粘膜與生物可降解聚氨酯（PU）復(fù)合支架的構(gòu)建以及動(dòng)物體內(nèi)重建修復(fù)食道缺損的可行性方法。
　　方法：
　　以密度梯度法提取和培養(yǎng)MSC，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD29、CD34、CD45、CD44、CD90的表達(dá)情況。分別采用與成熟平滑肌細(xì)胞共培養(yǎng)，EGF等誘導(dǎo)劑直接誘導(dǎo)的方法，誘導(dǎo)MS

2、C向平滑肌細(xì)胞和上皮細(xì)胞分化，通過形態(tài)觀察、免疫熒光染色等方法檢測(cè)上述誘導(dǎo)方法的有效性。另一方面，以靜電紡絲法制備PCL/SF（聚己內(nèi)酯/絲素）多孔納米纖維（模擬食道基膜niche），表面活性劑聯(lián)合DNA酶法制備脫細(xì)胞食道粘膜基質(zhì)，以生物可降解PU為基材制備具有微槽圖案的支架（支持肌組織生長(zhǎng)），以正常食道的組織學(xué)構(gòu)造為導(dǎo)向，復(fù)合上述多層支架構(gòu)造，制備了可同時(shí)支持食道組織中粘膜、粘膜下層和肌層細(xì)胞和組織再生的復(fù)合支架。以MSC為種子細(xì)胞，

3、新西蘭大白兔為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，首先行背部皮下埋植以檢測(cè)支架的組織相容性及支架在體內(nèi)的作用，包括炎癥、周圍組織供血、支架降解等；其次，建立小型動(dòng)物缺損模型，以片狀支架植入頸段食道，以檢測(cè)支架與體內(nèi)食道的作用以及修復(fù)小范圍食道缺損的可行性；最后，在上述實(shí)驗(yàn)成功的基礎(chǔ)上，構(gòu)建管狀食道支架，建立原位替代整環(huán)食道使其再生的技術(shù)，包括粘膜和肌層的再生。
　　結(jié)果：
　　培養(yǎng)的MSC細(xì)胞梭形，呈旋渦狀排列，強(qiáng)表達(dá)間充質(zhì)干細(xì)胞的特征蛋白CD29、

4、CD44、CD90；不表達(dá)CD34、CD45。誘導(dǎo)分化的MSC分別表達(dá)平滑肌細(xì)胞、上皮細(xì)胞的特異蛋
　　白α-actin和CK14。動(dòng)物皮下實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示支架具有良好的生物學(xué)性能；原位替代實(shí)驗(yàn)中，所有兔子未出現(xiàn)吻合口瘺，染色結(jié)果顯示手術(shù)部位實(shí)現(xiàn)上皮化，并可見平滑肌再生。
　　結(jié)論：
　　MSC采用上述方法可以完成平滑肌細(xì)胞、上皮細(xì)胞的誘導(dǎo)分化。由電紡絲纖維、脫細(xì)胞食道粘膜與有槽化聚氨酯（PU）復(fù)合構(gòu)建的支架，能支持MSC