百合對(duì)鹽脅迫的生理反應(yīng)及轉(zhuǎn)S6PDH基因植株的抗鹽性鑒定.pdf

1、鹽脅迫對(duì)植物的傷害機(jī)理已有很多報(bào)道，但對(duì)觀賞植物方面報(bào)道甚少，百合屬鹽敏感型花卉，對(duì)百合生理研究也僅局限于高溫脅迫和切花保鮮生理方面的探討。因此，研究百合鹽脅迫反應(yīng)及其耐鹽性，在理論和應(yīng)用方面都具有重要意義。本研究以麝香百合組培苗為材料，一方面以細(xì)胞膜透性、脯氨酸含量、抗氧化酶活性及抗氧化劑含量為測(cè)定指標(biāo)，探討它們的動(dòng)態(tài)變化及鹽脅迫下作為抗鹽性評(píng)價(jià)指標(biāo)的可行性；另一方面進(jìn)行了S6PDH基因轉(zhuǎn)百合的研究，獲得百合轉(zhuǎn)基因(SSPDH)抗性植

2、株，為抗鹽機(jī)理的研究和抗鹽良種的培育提供科學(xué)的理論依據(jù)。本研究主要研究結(jié)果如下： (1)百合組培苗對(duì)鹽脅迫的生理反應(yīng)經(jīng)實(shí)驗(yàn)得出8 g/L的NaCl濃度為百合組培苗的耐鹽性閾值，用8 g/L的NaCl處理百合組培苗，結(jié)果表明，其根系和葉片丙二醛(MDA)含量及電導(dǎo)率均較對(duì)照明顯升高，且根系MDA含量低于葉片，但脯氨酸(Pro)含量變化規(guī)律不明顯；隨鹽脅迫時(shí)間延長(zhǎng)，超氧化物岐化酶(SOD)、過(guò)氧化物酶(POD)、過(guò)氧化氫酶(CAT)

3、和抗壞血酸過(guò)氧化物酶(APX)活性均呈先升后降的趨勢(shì)，但根系酶活性變化幅度明顯小于葉片；同時(shí)鹽脅迫處理還降低了百合葉片和根系中ASA含量，但根系A(chǔ)SA含量下降幅度小于葉片。這些結(jié)果說(shuō)明，與葉片相比，百合根系耐鹽性更強(qiáng)；丙二醛(MDA)．含量及電導(dǎo)率均可作為百合抗鹽性評(píng)價(jià)的穩(wěn)定指標(biāo)，而脯氨酸(Pro)不宜。 (2)百合轉(zhuǎn)6-磷酸山梨醇脫氫酶(S6PDH)基因植株的獲得A．以麝香百合組培苗葉片為基因轉(zhuǎn)化的受體材料，利用根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)

4、法將$6PDH基因?qū)氚俸?。通過(guò)對(duì)影響農(nóng)桿菌介導(dǎo)百合遺傳轉(zhuǎn)化的幾個(gè)主要因素的探討，確定了各主要影響因素值：百合葉片在分化培養(yǎng)基上預(yù)培養(yǎng)3天，農(nóng)桿菌浸染適宜濃度為Od～00為0.6，浸染時(shí)間10min，在共培養(yǎng)培養(yǎng)基上暗培養(yǎng)3天，可以明顯提高百合的轉(zhuǎn)化率。以50mg/LKan濃度作為篩選麝香百合葉片抗性芽的選擇壓力。 B．對(duì)抗性篩選出的40株麝香百合苗進(jìn)行PCR檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)有6棵株系擴(kuò)增出目標(biāo)條帶。在10g/LNaCI脅迫3天后，通

5、過(guò)對(duì)該6個(gè)株系S6PDH酶活性的測(cè)定，測(cè)得株系轉(zhuǎn)7和轉(zhuǎn)9酶活性：轉(zhuǎn)7為57.34 umrnol NADPH/g/FWh，轉(zhuǎn)9為11.50 umrnol NADPH/g/FWh，初步證明外源基因已整合到百合基因組中。 (3)百合轉(zhuǎn)S6PDH基因植株的抗鹽性鑒定對(duì)PCR檢測(cè)出的6棵陽(yáng)性植株進(jìn)行的相關(guān)的生理指標(biāo)測(cè)定，發(fā)現(xiàn)只有轉(zhuǎn)7株系表現(xiàn)出明顯的抗性規(guī)律：隨著鹽脅迫(10 g/L NaCl)時(shí)間的延長(zhǎng)，轉(zhuǎn)7株系葉片與對(duì)照(非轉(zhuǎn)化苗)電導(dǎo)