轉(zhuǎn)Lea基因小黑楊花粉植株抗旱、耐鹽性分析.pdf

1、本研究利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將從極度抗旱、耐鹽植物檉柳中克隆得到的lea基因(late embryogenesis abundant，)導(dǎo)入小黑楊花粉植株基因組中，通過(guò)對(duì)轉(zhuǎn)基因小黑楊和非轉(zhuǎn)基因?qū)φ招『跅畹柠}、旱脅迫試驗(yàn)，比較它們抗性的強(qiáng)弱，篩選出抗性優(yōu)良的轉(zhuǎn)基因株系。 對(duì)小黑楊花粉植株進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化，共獲得11株卡那霉素抗性芽，對(duì)其進(jìn)行PCR檢測(cè)，結(jié)果均為陽(yáng)性；進(jìn)行PCR-Southem雜交，各轉(zhuǎn)基因株系均出現(xiàn)雜交譜帶，證明lea基因已

2、整合到小黑楊花粉植株基因組中；進(jìn)一步對(duì)11個(gè)株系進(jìn)行Northem雜交和實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測(cè)，結(jié)果表明外源基因在RNA水平上得到表達(dá)。 分別對(duì)11個(gè)轉(zhuǎn)基因株系進(jìn)行了NaCl脅迫和干旱脅迫試驗(yàn)，分析逆境脅迫條件下轉(zhuǎn)基因小黑楊與非轉(zhuǎn)基因?qū)φ招『跅畹谋?MDA)含量、相對(duì)電導(dǎo)率、過(guò)氧化物酶(POD)活性、葉綠素含量、凈光合速率等指標(biāo)的變化，結(jié)果表明，在200 mmol．L<'-1>NaCl處理6 d后，各轉(zhuǎn)基因株系POD活

3、性與對(duì)照之間無(wú)明顯規(guī)律；平均：MDA含量和質(zhì)膜相對(duì)透性分別低于對(duì)照植株的14.4％和14.5％；平均凈光合速率和葉綠素含量分別高于對(duì)照植株的140％和15.8％，綜合耐鹽性分析表明：耐鹽性從強(qiáng)到弱分別為T(mén)11>T1> T14>T6>T3>T10>T5>T13>T4>T9>T7>CK。綜上說(shuō)明，鹽脅迫條件下，轉(zhuǎn)基因小黑楊受害程度明顯小于對(duì)照，抗鹽能力強(qiáng)于對(duì)照。 干旱脅迫處理7 d后，轉(zhuǎn)基因小黑楊相對(duì)電導(dǎo)率平均低于對(duì)照小黑楊11.4

4、1％；平均MDA含量低于對(duì)照小黑楊17.71％；而此時(shí)POD活性與對(duì)照之間仍無(wú)明顯規(guī)律；而轉(zhuǎn)基因小黑楊的葉綠素平均含量為47.43 mg．g<'-1>，高于對(duì)照的14.57％，平均凈光合速率高于對(duì)照植株的31.5％，綜合抗旱性分析表明：抗旱性從強(qiáng)到弱分別為T(mén)11>T9 >T14>T1>T13>T7>T10>T3>T6>T4>T5>CK。說(shuō)明lea基因的導(dǎo)入提高了小黑楊的抗旱能力。 綜合以上結(jié)果，lea基因的表達(dá)能夠不同程度提高轉(zhuǎn)