常壓離子源在藥物-血漿蛋白親和力考察和游離血藥濃度檢測(cè)中的應(yīng)用.pdf

1、近年來(lái),隨著藥物-血漿蛋白親和力以及游離血藥濃度的研究領(lǐng)域的發(fā)展,研究者對(duì)其檢測(cè)手段不斷提出更高的要求,發(fā)展新的高通量、便捷的檢測(cè)方法意義重大。常壓質(zhì)譜技術(shù)能直接、實(shí)時(shí)、快速、原位的提供分子的結(jié)構(gòu)信息,將它應(yīng)用于藥物-血漿蛋白親和力以及游離血藥濃度的檢測(cè)中,能為其研究提供一條新的途徑。本論文著重研究了基于解吸附電噴霧離子源和文丘里簡(jiǎn)易常壓超聲噴霧離子源檢測(cè)藥物-血漿蛋白親和力以及游離血藥濃度的新方法。主要包括以下工作:
　　一、利

2、用解吸附電噴霧質(zhì)譜(Desorption Electrospray IonizationMass Spectrometry, DESI-MS)解決了目前藥物-血漿蛋白研究存在的三方面的問題。第一,在負(fù)電區(qū)域抑制解離機(jī)理的基礎(chǔ)上,有負(fù)電位點(diǎn)的蛋白不會(huì)釋放特異性結(jié)合的配體,本身可以作為參比蛋白,省去了為每一種藥物尋找參比蛋白的過程。第二,提取離子流圖檢測(cè)的是藥物分子的準(zhǔn)分子離子峰,而不是藥物-蛋白復(fù)合物,這樣,氣相庫(kù)倫爆炸誘導(dǎo)解離可以起到一

3、個(gè)積極的作用,而不是影響檢測(cè)的作用。第三,我們自行搭建的全自動(dòng)移動(dòng)平臺(tái)可以解決分析速度慢的問題。我們選擇僅有一個(gè)特異性結(jié)合位點(diǎn)的α1-酸性糖蛋白作為模式蛋白,先前文獻(xiàn)已經(jīng)報(bào)導(dǎo)了DMOA可以作為α1-酸性糖蛋白的置換劑。我們的工作分為三部分,第一,用(R)、(S)型氨氯地平作為模式配體,證明了負(fù)電區(qū)域抑制解離機(jī)理,它們與α1-酸性糖蛋白的立體選擇性特異性結(jié)合已經(jīng)被報(bào)導(dǎo)。第二,我們用5種α-腎上腺素受體阻滯劑和10種β-腎上腺素受體阻滯劑證

4、明了我們方法的高通量屬性。我們?cè)?.3分鐘內(nèi)獲得了15*3個(gè)樣本點(diǎn)的全部數(shù)據(jù)信息。第三,幾乎不與α1-酸性糖蛋白發(fā)生作用的阿替洛爾和莫索尼定被選為內(nèi)標(biāo)物,以校正噴入離子傳輸管體積的差別,與先前的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相一致,證明我們的方法至少是半定量的方法。
　　二、利用文丘里-簡(jiǎn)易常壓超聲噴霧質(zhì)譜(Venturi Easy Ambient Sonic-Spray Ionization Mass Spectrometry, V-EASI-MS)

5、建立了一種實(shí)時(shí)在線監(jiān)測(cè)藥物-負(fù)電位點(diǎn)蛋白結(jié)合的方法,體系由兩部分組成:商業(yè)化的線性離子阱(LTQ)質(zhì)量分析器和自行搭建的文丘里-簡(jiǎn)易常壓超聲噴霧離子源。我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)一步證明了我們首先提出并驗(yàn)證的負(fù)電區(qū)域抑制解離機(jī)理(Anionic region inhibited dissociation mechanism)。機(jī)理描述了負(fù)電區(qū)域在特異性結(jié)合配體解離中的作用。為了區(qū)分特異性以及非特異性的相互作用,我們首先在沒有特異性結(jié)合藥物解離的條