用煙草蝕紋病毒防治玉米矮花葉病的研究.pdf

1、玉米矮花葉病是玉米生產(chǎn)上的一類(lèi)重要病毒病，在世界各玉米產(chǎn)區(qū)都有發(fā)生，長(zhǎng)期以來(lái)一直嚴(yán)重影響著玉米的產(chǎn)量和質(zhì)量。在我國(guó)，自1968年首次報(bào)道河南新鄉(xiāng)發(fā)生玉米矮花葉病害以來(lái)，該病害在我國(guó)北部和西北部地區(qū)均大面積發(fā)生，玉米產(chǎn)量損失在20％～80％，已經(jīng)成為制約我國(guó)玉米生產(chǎn)的主要問(wèn)題之一。本文在克隆玉米矮花葉病毒CP基因的基礎(chǔ)上，運(yùn)用生物學(xué)和分子生物學(xué)手段研究了煙草蝕紋病毒(Tobacco etch virus,TEV)與甘蔗花葉病毒(Sugar

2、cane mosaic virus，SCMV)之間的交互保護(hù)作用，證實(shí)了TEV與SCMV之間存在交互保護(hù)作用的現(xiàn)象，這不僅為植物病毒馬鈴薯Y屬(Potyvirus)不同病毒間交互保護(hù)作用的研究奠定了基礎(chǔ)，而且也開(kāi)拓了植物病毒病防治的新思路。 克隆了陜西分離物SCMV CP基因(登錄號(hào)為DQ846832)，其基因序列與浙江SCMVCP基因的核苷酸同源率為99.79％，氨基酸的同源率為100％。 在防蟲(chóng)網(wǎng)室內(nèi)，對(duì)TEV與SC

3、MV交互保護(hù)作用設(shè)計(jì)了四種處理方式，處理I先用10％TEV保護(hù)接種玉米，7d后挑戰(zhàn)接種10％SCMV，結(jié)果表明玉米在初期葉面光滑，色澤均勻， 10d后僅有13.8％的植株開(kāi)始輕微褪綠，處理Ⅱ只挑戰(zhàn)接種SCMV作為陽(yáng)性對(duì)照的玉米，在前期心葉表現(xiàn)出褪綠癥狀，后期植株為典型玉米矮花葉癥狀；10d后全部發(fā)病。處理Ⅲ只保護(hù)接種TEV的玉米無(wú)癥狀，處理Ⅳ不接種任何病毒的玉米生長(zhǎng)狀況良好，健康無(wú)癥狀。 通過(guò)PCR檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，從只接種SCM

4、V的玉米植株中擴(kuò)增片段大小約為1.1kb，確定為SCMV CP基因；從先接種TEV再接種SCMV植株中同樣檢測(cè)到該基因，但條帶較弱，而不接種任何病毒植株對(duì)照均未出現(xiàn)特異性擴(kuò)增條帶。 進(jìn)一步用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)，以只挑戰(zhàn)接種的陽(yáng)性對(duì)照為參照因子，其2<'-△△>u值是經(jīng)18S rRNA校正后1倍量的目的基因表達(dá)，AACt=0，2<'-△△ct>=1，對(duì)于處理組的樣品，相對(duì)于參照因子目的基因表達(dá)的倍數(shù)為2<'-△△ct>。經(jīng)保護(hù)