生物型人工半月板的研制和重建山羊膝關(guān)節(jié)半月板缺失的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、在本實(shí)驗(yàn)利用獲得專利的組織處理技術(shù)，制備出新型生物型半月板，進(jìn)行了以下研究：二實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果 第一部分：生物型半月板的體外降解方法：制備去抗原生物型半月板，選擇膠原酶、木瓜蛋白酶、透明質(zhì)酸酶和胰酶，對(duì)去抗原和新鮮半月板37℃酶解3、7、15、30d。另取2種半月板在PBS液37℃下水解30d。采用失重法、紫外光譜分析及掃描電鏡測定材料的降解特性。 結(jié)果：2種半月板酶解的效果顯著，以胰酶最為明顯，但去抗原半月板降解程度明顯

2、低于新鮮半月板。其水解率分別0.76％、0.81％。掃描電鏡觀察下，去抗原半月板的空間結(jié)構(gòu)改變程度較新鮮半月板明顯低。去抗原半月板的親水性較新鮮半月板稍低：吸水率分別為157％及188％；保水率分別為152％及167％。 第二部分：生物型半月板的體外生物相容性實(shí)驗(yàn) 方法：分離培養(yǎng)兔軟骨細(xì)胞，與生物型半月板和新鮮豬半月板混和培養(yǎng)，分別在細(xì)胞接種第1、2、3周將2種半月板材料的細(xì)胞-材料復(fù)合物各取出3塊，常規(guī)HE染色，光鏡下

3、觀察細(xì)胞在材料表面生長情況。同樣時(shí)間段，將2種細(xì)胞-材料復(fù)合物各取出3塊，掃描電鏡下觀察軟骨細(xì)胞在材料表面的生長情況。 結(jié)果：成品生物型半月板仍又輕度殘留細(xì)胞毒性，經(jīng)過PBS漂洗后殘留毒性基本消失。軟骨細(xì)胞和生物型半月板混和培養(yǎng)一周后，HE染色可見有細(xì)胞貼附于材料表面及側(cè)壁。培養(yǎng)2周，細(xì)胞數(shù)量較前增多，材料表面可見細(xì)胞黏附成層狀，細(xì)胞有少量基質(zhì)分泌，沉積于細(xì)胞周圍，材料內(nèi)部未見軟骨細(xì)胞長入。培養(yǎng)3周時(shí)，材料表面可見大量細(xì)胞黏附成

4、層狀，有的多達(dá)3-4層細(xì)胞，有較多基質(zhì)分泌。掃描電鏡觀察，隨著培養(yǎng)時(shí)間延長，細(xì)胞在材料表面生長良好，細(xì)胞密度增加。3周時(shí)，可見細(xì)胞粘附在材料表面，有偽足伸出，細(xì)胞間通過偽足相互連接，并可見細(xì)胞分泌的大量基質(zhì)沉積于細(xì)胞周圍和材料表面，部分區(qū)域形成類似于軟骨陷窩樣結(jié)構(gòu)。新鮮半月板和生物型半月板相比，在細(xì)胞數(shù)量方面的差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。形態(tài)學(xué)觀察表明，軟骨細(xì)胞在生物型半月板表面可以正常黏附、增殖，并能較好地保持其形態(tài)、表型和基質(zhì)

5、分泌功能。 第三部分：生物型半月板移植修復(fù)羊膝關(guān)節(jié)半月板缺失 方法：切除山羊的膝關(guān)節(jié)內(nèi)側(cè)半月板，對(duì)生物型半月板塑形后植入羊的膝關(guān)節(jié)，分別于術(shù)后1月、3月、6月、1年處死動(dòng)物，行組織學(xué)，掃描電鏡及墨汁灌注觀察微循環(huán)等檢測。 結(jié)果：所有動(dòng)物患肢切口均愈合良好，無感染，無死亡。植入半月板與周圍組織愈合良好，連接緊密。隨著術(shù)后時(shí)間的延長，植入半月板逐漸吸收溶解，植入半月板內(nèi)出現(xiàn)活的細(xì)胞，但術(shù)后1年仍有約1/4的組織無活細(xì)