尿毒清顆粒對慢性腎功能衰竭藥理作用的分子機制.pdf

1、慢性腎功能衰竭(Chronic Renal Failure,CRF)見于各種慢性腎臟疾病的晚期,為各種原發(fā)和繼發(fā)性慢性腎臟疾病持續(xù)發(fā)展的共同轉歸。發(fā)病率大約萬分之一,死亡率高達67.6％,占人群死亡率的10％,只有20％的患者在排除可逆因素后獲得緩解。當患者進入慢性腎功能衰竭終末期(尿毒癥)階段后,治療棘手,全身各系統(tǒng)都會受損,嚴重危害人類的健康和生命。西藥治療常采用血管緊張素轉換酶抑制劑(ACEIs)和血管緊張素受體拮抗劑(ARBs)

2、,但這兩種藥物只能達到緩解慢性腎功能衰竭的作用,而無法阻斷慢性腎功能衰竭的進程；隨著技術的發(fā)展出現(xiàn)了透析和移植兩個腎臟替代治療方式,但是價格昂貴,供腎不足等因素又限制了其應用。因此,探求中醫(yī)療法是一條重要途徑。尿毒清顆粒(UremicClearance Granule)主要用于慢性腎功能衰竭氮質血癥期和尿毒癥早期、中醫(yī)辨證屬脾虛濕濁癥和脾虛血瘀癥者的治療,已有十余年的臨床應用歷史,但大多數(shù)研究屬于臨床療效觀察,對于作用機理方面的研究較少

3、,動物實驗研究尚缺乏深度,為了使其得到廣泛的推廣應用,利用現(xiàn)代科學技術手段與多學科方法研究該方的有效成分和作用機理就成了當務之急。
　　 本文以腺嘌呤飼喂法建立的慢性腎功能衰竭Wistar大鼠模型為實驗材料,采用分子生物學的方法從DNA甲基化修飾、關鍵基因的mRNA及蛋白表達,以及疾病相關代謝產(chǎn)物三個層次系統(tǒng)地研究了尿毒清顆粒對慢性。腎功能衰竭治療的分子機制,研究結果為尿毒清顆粒在臨床治療上的應用提供了理論依據(jù)。主要結果包括：⑴

4、通過本研究發(fā)現(xiàn)尿毒清顆粒可以在mRNA和蛋白質水平減少轉化生長因子-β1(TGF-β1)的表達。TGF-β1是引起腎小球硬化的主要介質,以其為靶向的治療已成為近年來的研究熱點。我們用SYBR Green實時熒光定量PCR技術檢測了正常對照組大鼠、病理對照組大鼠和經(jīng)尿毒清治療后大鼠腎皮質TGF-β1及其下游基因mRNA的表達。為了確證TGF-β1 mRNA在本實驗中表達升高是否引起了TGF-β1蛋白表達的增多,我們用免疫組織化學技術檢測了

5、大鼠腎皮質TGF-β1蛋白的表達。為了進一步研究各實驗組TGF-β1表達變化出現(xiàn)的因為,我們用甲基化特異性PCR技術檢測單基因TGF-β1啟動子甲基化狀態(tài)的變化,發(fā)現(xiàn)慢性腎功能衰竭大鼠TGF-β1啟動子有些位點出現(xiàn)了去甲基化現(xiàn)象,而尿毒清顆粒治療組該位點甲基化狀態(tài)得到恢復。結果表明尿毒清顆粒對慢性腎功能衰竭的治療是通過下調以TGF-β1為中心的多基因表達來進行的。⑵生化試驗研究發(fā)現(xiàn)尿毒清顆?？梢越档吐?。腎功能衰竭大鼠血清中同型半胱氨酸

6、濃度,減輕高同型半胱氨酸血癥。慢性腎功能衰竭患者血清同型半胱氨酸水平升高發(fā)生率高達82.5％,其水平為正常人的2～3倍。高同型半胱氨酸可能通過損害血管內皮,刺激血管平滑肌增殖等因為在慢性腎功能衰竭發(fā)病機制中起重要作用。我們用高效液相色譜檢測了正常組對照大鼠、病理對照組大鼠和經(jīng)尿毒清治療后大鼠血清中同型半胱氨酸的含量,發(fā)現(xiàn)與病理對照組相比,經(jīng)尿毒清治療的大鼠血清同型半胱氨酸濃度顯著下降。此結果揭示了尿毒清顆?？梢酝ㄟ^提高對同型半胱氨酸的清

7、除達到恢復慢性腎功能衰竭大鼠腎功能的作用。⑶DNA甲基化研究發(fā)現(xiàn)尿毒清顆粒可以使慢性腎功能衰竭大鼠基因組DNA從低甲基化狀態(tài)恢復到正常水平。同型半胱氨酸的積累會導致體內DNA甲基化異常,本實驗對各組大鼠腎皮質基因組DNA甲基化狀態(tài)進行甲基化敏感擴增多態(tài)性分析,結果發(fā)現(xiàn)慢性腎功能衰竭大鼠腎皮質基因組DNA出現(xiàn)了低甲基化現(xiàn)象,尿毒清顆粒治療可以使其恢復為正常水平。結果揭示尿毒清顆?？梢酝ㄟ^表觀遺傳機制調節(jié)基因組DNA的甲基化狀態(tài)來對慢性腎功