間充質(zhì)干細(xì)胞輸注在血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷和動(dòng)脈粥樣硬化中的作用.pdf

1、目的：⑴目前的研究中，我們通過球囊損傷術(shù)建立兔頸動(dòng)脈內(nèi)皮剝脫模型，旨在探討MSC治療對血管內(nèi)皮細(xì)胞再生和血管功能恢復(fù)的作用。⑵通過建立兔動(dòng)脈粥樣硬化模型，探索靜脈輸注MSC在動(dòng)脈粥樣硬化條件下的安全性及其對動(dòng)脈粥樣硬化的影響。 方法：①異基因MSC由兔骨髓穿刺液培養(yǎng)獲得。培養(yǎng)第三代的MSC經(jīng)熒光染料CM—DiI標(biāo)記后用于細(xì)胞治療。通過在兔頸總動(dòng)脈中穿過膨脹的球囊導(dǎo)管建立兔頸總動(dòng)脈內(nèi)皮剝脫模型。48只新西蘭白兔隨機(jī)分成三組：正常對

2、照組4只，不接受任何處理；MSC注射組22只，血管球囊損傷術(shù)后立即接受細(xì)胞治療；生理鹽水注射組22只，血管球囊損傷術(shù)后立即接受生理鹽水注射。MSC注射組動(dòng)物在損傷的血管腔中給予105 MSC，生理鹽水對照組動(dòng)物給予等體積的生理鹽水，夾閉動(dòng)脈孵育30分鐘，孵育完成后縫合手術(shù)切口。實(shí)驗(yàn)后第3天和第7天取MSC注射組兔(n=5)、生理鹽水注射組兔(n=5)和正常對照組兔(n=4)的頸動(dòng)脈，提取RNA，用實(shí)時(shí)定量PCR方法檢測相關(guān)炎癥因子的表達(dá)

3、，包括白介素6、白介素10、轉(zhuǎn)化生長因子β、干擾素γ和腫瘤壞死因子α。四周后處死剩余所有動(dòng)物，分離頸動(dòng)脈用于血管舒張功能檢測和組織病理分析。②體外培養(yǎng)兔骨髓穿刺液，獲得MSC。30只新西蘭白兔隨機(jī)分為三組：正常飲食組6只，普通飼料飼養(yǎng)；高脂飲食組12只，高膽固醇高脂飼料喂養(yǎng)5周后經(jīng)耳緣靜脈注射生理鹽水；MSC注射組12只，高膽固醇高脂飼料喂養(yǎng)5周后經(jīng)耳緣靜脈注射1.15×107/kg體重MSC。分別于實(shí)驗(yàn)前，實(shí)驗(yàn)第5周，第9周和第13周

4、測體重和空腹血脂水平。實(shí)驗(yàn)第13周時(shí)處死所有動(dòng)物，形態(tài)學(xué)分析檢測動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成和主動(dòng)脈外膜滋養(yǎng)血管增生。 結(jié)果：⑴血管球囊損傷術(shù)后四周，激光共聚焦纖維鏡下觀察頸動(dòng)脈，可見MSC注射組兔損傷的頸動(dòng)脈血管壁中有紅色熒光克隆存在，顯示注射的MSC能夠歸巢到血管損傷部位。組織病理分析顯示，MSC注射組兔與生理鹽水注射組兔相比較，頸動(dòng)脈再內(nèi)皮化面積增加，內(nèi)膜增生減少(p<0.05)。MSC注射組兔與生理鹽水注射組兔相比較，損傷部位頸

5、動(dòng)脈內(nèi)皮依賴性舒張功能明顯改善(p<0.01)。實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果顯示，與生理鹽水注射組動(dòng)物比較，損傷后第3天和第7天，MSC注射組兔頸動(dòng)脈免疫抑制因子轉(zhuǎn)化生長因子β(TGFβ)表達(dá)增加；損傷后第3天，MSC注射組兔頸動(dòng)脈促炎因子白細(xì)胞介素6(IL—6)表達(dá)降低(p<0.05)。⑵MSC注射組與高脂飲食組相比，主動(dòng)脈竇斑塊面積顯著增大(斑塊面積占主動(dòng)脈竇面積的百分比分別為23.35±3.51％和11.39±3.08％，p<0.05)，整

6、體主動(dòng)脈斑塊形成明顯增多(斑塊面積占主動(dòng)脈面積的百分比分別為76.64±12.70％和57.61±9.00％，p<0.05)。MSC注射組兔主動(dòng)脈外膜滋養(yǎng)血管增生明顯，毛細(xì)血管密度增加。 結(jié)論：①結(jié)果證明局部注射異基因MSC抑制了損傷局部的炎癥反應(yīng)，促進(jìn)了球囊損傷術(shù)后頸動(dòng)脈內(nèi)皮再生及血管功能恢復(fù)，從而抑制了血管惡性重塑。這為我們了解間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)特性提供了新的證據(jù)、同時(shí)也為治療血管功能失調(diào)以及阻止血管成形術(shù)后狹窄提供了新的