血管生成素-1基因修飾的骨髓間充質(zhì)干細胞治療大鼠動脈粥樣硬化的實驗研究.pdf

1、目的：包裝帶有大鼠血管生成素-1(Angiopoeitin-1，Ang-1)基因之慢病毒載體，并感染大鼠骨髓間質(zhì)干細胞(rat mesenchymal stem cells，rMSCs)后，進一步檢測Ang-1表達，獲得有生物活性Ang-1修飾的rMSCs(Angl-rMSCs)，并將其移植入動脈粥樣硬化模型大鼠中，探討Ang-1基因修飾MSCs移植對大鼠動脈粥樣硬化的影響。 方法：在脂質(zhì)體介導下，載體質(zhì)粒pSL-Amgl-IR

2、ES2-EGFP，與包裝質(zhì)粒HEILPER，包膜質(zhì)粒VSVG共轉(zhuǎn)染293T細胞包裝生產(chǎn)慢病毒。收集病毒上清進行超速離心濃縮。PCR檢測病毒基因組中目的基因Ang-1的插入。將病毒上清感染rMSCs，通過熒光顯微鏡觀察報告基因的表達。球囊損傷+高脂飲食法構(gòu)建大鼠頸動脈粥樣硬化模型，頸動脈粥樣硬化模型隨機分為3組，單純損傷組，(n=8)、Angl-rMSCs組(n=8)、pNL-rMSCs組(空載體組，n=8)。通過血管外膜下直接注射移植基

3、因修飾的間充質(zhì)干細胞。分別于2周及2個月后處死動物，取頸動脈組織，熒光顯微鏡觀察EGFP(+)細胞，Ⅷ因子免疫熒光觀察MSCs分化情況，HE染色檢測各組動脈內(nèi)膜/中層比差別。 結(jié)果：三質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細胞后熒光激發(fā)可見大量綠色熒光。感染的Ang1-rMSCs、pNIL-rMSCs熒光激發(fā)后可見綠色熒光。感染的rMSCs移植入頸動脈后均可在熒光顯微鏡下被檢出，Ⅷ因子免疫熒光提示rMSCs可分化成具有內(nèi)皮細胞標志的細胞系，pNL-